狂犬病是由狂犬病病毒引起的人兽共患病。人和所有温血动物对狂犬病病毒都易感染。由于该病一旦发病目前尚无法医治,又由于动物传染源广泛存在,控制难度很大,所以对人及动物狂犬病感染的诊断研究十分重要。直接快速免疫组化法(Direct Rapid Immunohistochemical Test,DRIT)是美国CDC狂犬病室新近建立的一种以酶标记抗狂犬病毒单克隆抗体检测狂犬病毒抗原的诊断方法,根据国家用于诊断狂犬病病毒动物的标准操作程序规定,DRIT是一种尚未得到认证的验证d FA方法的标准。美国CDC狂犬病室进行的评价实验显示DRIT与WHO推荐“金标准”DFA检测结果的符合率为100%。本试剂是本单位与中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所合作研究的成果。由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所提供抗狂犬病病毒单克隆抗体细胞株、狂犬病病毒阳性脑组织印片和阴性脑组织印片。本单位对单克隆抗体细胞进行培养,对单抗进行纯化和标记,将抗体应用免疫组化方法对狂犬病病毒抗原进行检测,对实验方法进行优化,选择最佳实验方案,配套实验材料、耗材及包装,将所有材料组装成试剂盒。操作过程如下:将抗狂犬病病毒单克隆抗体细胞株(编号:4A12)复苏后进行培养,然后植入到Balb/c小鼠腹腔内产生腹水。回收的腹水用间接ELISA方法检测抗体效价,检测到具有较高的效价。制备的单克隆抗体腹水经过盐析纯化后标记生物素。用间接ELISA方法检测标记后的抗体效价,检测到具有较高的效价。采用接种有狂犬病病毒的细胞板进行小试,确定了该实验方法在检测狂犬病病病毒的可行性。筛选抗体生物素标记物及链霉亲和素HRP酶标记物的最佳工作浓度,抗体生物素标记物的最佳工作浓度为1:100而链霉亲和素HRP酶标记物的最佳工作浓度为1:1000。然后检测狂犬病病毒抗原阳性和阴性脑组织涂片,用该方法可鉴别出狂犬病病毒抗原阳性和阴性。最后,将本试验所需的所有试剂、材料和耗材分装后进行试剂盒的组装。本实验用直接快速免疫组化法(DRIT)确定了4A12单抗株能特异性结合狂犬病病毒及包涵体,且用光学显微镜就可以观察到脑组织内包涵体的存在。因此,该试剂可以应用于直接快速免疫组化法检测狂犬病病毒抗原,且方便了实验操作,节约了实验成本,提高了实验的特异性和可重复性。目前,国内还没有用该方法检测狂犬病病毒的成品试剂,因此,可对该试剂做进一步的研究,使直接快速免疫组化法检测狂犬病病毒抗原的方法在基层实验室得到更加广泛的推广。