苹果ZF-HD家族鉴定与MdMYB113耐盐功能研究

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高盐等非生物胁迫不仅对植物的生长发育危害严重,还会降低作物的产量和品质。本研究以苹果‘金冠’为试验材料,通过定量q PCR技术筛选出可受盐胁迫诱导上调表达的抗盐候选目的基因Md MYB113,并利用苹果愈伤和烟草体系对其进行了初步功能研究;此外,基于苹果基因组数据库对ZF-HD基因家族进行了基因结构、理化性质、共线性分析等多方面的生物信息学分析。得出的主要结论如下:根据基因登录号在苹果‘金冠’基因组中的信息,克隆了苹果Md MYB113基因。该基因编码区全长为804 bp,可编码267个氨基酸,等电点为5.12。系统进化树结果表明Md MYB113与拟南芥的At MYB13、At MYB14、At MYB15和苹果Md MYB58的亲缘关系最近。氨基酸序列比对分析显示,Md MYB113蛋白具有R2和R3序列的保守结构域,属于Md R2R3类型的MYB转录因子。Md MYB113蛋白定位于细胞核,具有一定的转录自激活活性。对该基因编码区上游的启动子元件预测表明,在启动子元件中含有与植物逆境激素、非生物胁迫相关的功能作用元件。对Md MYB113基因在Na Cl、PEG、低温等非生物胁迫下多个时间段进行定量表达分析,表明Md MYB113基因的表达会因高盐胁迫强烈诱导而上调表达。苹果Md MYB113在转基因苹果愈伤中过表达增强了其对盐胁迫的耐受性。证明该基因作为正调控因子参与到高盐胁迫反应中。基于苹果基因组数据库对ZF-HD基因家族进行了生物信息学分析,最终鉴定出14个ZF-HD基因并命名为Md ZHD1~Md ZHD14。这些ZF-HD基因预计可编码104(Md ZHD7)至376(Md ZHD4)个氨基酸,推定分子量为11.60 k Da(Md ZHD7)至41.65 k Da(Md ZHD4),蛋白质等电点范围从6.42(Md ZHD7)至9.6(Md ZHD13)。系统发育分析表明,14个Md ZHD可以分为四个不同的组,且同组的基因保守结构域具有相似性。基因结构分析表明,大多数Md ZHD成员只有一个外显子,Md ZHD6和Md ZHD13有两个外显子,而Md ZHD8有5个外显子。对苹果ZHD家族的保守基序进行分析表明,所有苹果ZHD都具有ZHD家族的典型特征。亚细胞定位预测显示Md ZHD7和Md ZHD8蛋白分别定位于细胞质和细胞外,大多数其他的Md ZHD都预测定位于细胞核中。14个苹果Md ZHD信号肽预测表明苹果Md ZHD蛋白无信号肽的剪切位点。Md ZHD基因的表达热图表明该基因在苹果生长发育的各个阶段发挥着重要的调节作用。对ZF-HD家族的共线性分析表明拟南芥与苹果ZHD家族之间不存在共线性关系。
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