【摘 要】
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目的：构建含有人端粒酶逆转录酶(Human Telomerase Reverse Transcriptase, hTERT)启动子的重组表达载体pEGFP-C3-hTERTp,并观察其在真核细胞中的表达情况。方法：1)从抗凝人全
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目的：构建含有人端粒酶逆转录酶(Human Telomerase Reverse Transcriptase, hTERT)启动子的重组表达载体pEGFP-C3-hTERTp,并观察其在真核细胞中的表达情况。方法：1)从抗凝人全血中提取人基因组DNA。2)通过PCR方法扩增出hTERTp,将其连接至pGEM-T Easy载体上通过电泳和测序进行检测。3)用PCR扩增出来的hTERTp取代pEGFP-C3载体上原有的CMV启动子,重组质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,并通过PCR、酶切和测序鉴定。4)用脂质体LipfectamineTM 2000介导质粒pEGFP-C3-hTERTp瞬时转染人胚肾293A细胞,48-72h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果：1)琼脂糖凝胶电泳显示276bp的hTERTp扩增成功,测序结果与GeneBank中hTERT启动子DNA序列完全一致。2)pEGFP-C3-hTERTp重组质粒经酶切、PCR、测序检测,结果正确。3) pEGFP-C3-hTERTp转染人胚肾293A细胞可见绿色荧光蛋白的表达。结论：成功构建了真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-hTERTp,重组载体能够在真核细胞中表达,为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗奠定了基础。
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