【摘 要】
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目的:探讨小白菊内酯(PTL)诱导GIST-T1细胞株氧化应激促进线粒体介导的GIST细胞凋亡的影响,为临床应用小白菊内酯治疗GIST提供实验依据。方法:选择人GIST-T1细胞株进行体外培养48小时,使用0μM,4μM,8μM,16μM,32μM和64μM的PTL培养GIST-T1细胞48小时,采用CCK-8实验计算出各组细胞的存活率,并得出半数抑制浓度(IC50=20μM)。实验分为IC50、
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目的:探讨小白菊内酯(PTL)诱导GIST-T1细胞株氧化应激促进线粒体介导的GIST细胞凋亡的影响,为临床应用小白菊内酯治疗GIST提供实验依据。方法:选择人GIST-T1细胞株进行体外培养48小时,使用0μM,4μM,8μM,16μM,32μM和64μM的PTL培养GIST-T1细胞48小时,采用CCK-8实验计算出各组细胞的存活率,并得出半数抑制浓度(IC50=20μM)。实验分为IC50、IC50/2和IC50/4三组,对照组用含0.2%DMSO的McCoy 5A培养基培养。使用划痕法检测小白菊内酯处理48小时后各组GIST-T1细胞增殖和迁移能力。使用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测各组细胞内的活性氧(ROS)的水平。流式细胞仪和TUNEL染色法用于检测小白菊内酯培养48小时后各组GIST-T1细胞凋亡水平。利用蛋白质印迹法评估过小白菊内酯培养48小时后Bax和Bcl-2的表达以及细胞色素c和裂解的半胱天冬酶(Caspase-3,-8和-9)的表达。应用JC-1方法确定小白菊内酯培养48小时后的的线粒体膜电位,使用透射电子显微镜(TEM)进一步检查超微结构。结果:1.CCK-8和划痕法检测结果表明小白菊内酯抑制GIST-T1增殖和迁移,呈剂量依赖性,随药物浓度升高抑制效果增强(P<0.01)。2.利用小白菊内酯处理48小时后GIST-T1细胞内活性氧水平升高,且与小白菊内酯浓度呈正比(P<0.01)。3.流式细胞术和TUNEL染色结果表明小白菊内酯诱导细胞凋亡,其浓度越高细胞凋亡率越高(P<0.01)。4.JC-1、透射电子显微镜(TEM)和蛋白质印迹法结果表明经小白菊内酯处理的GIST-T1细胞的线粒体诱导细胞凋亡。5.蛋白印迹法结果表明小白菊内酯提高Bax/Bcl-2比率(P<0.05),且呈剂量依赖性,同时小白菊内酯激活细胞色素c和半胱天冬酶(Caspase)活性,进一步增强内源性细胞凋亡因子Caspase-3和9的表达(P<0.01),但对于外源性细胞凋亡因子Caspase-8并无影响。结论:1.小白菊内酯以剂量依赖性方式抑制胃肠道间质瘤细胞GIST-T1的增殖和迁移。2.小白菊内脂影响了肿瘤细胞线粒体膜电位变化,使细胞进入凋亡途径。3.小白菊内脂可以通过氧化应激相关途径诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖及迁移作用。
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