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研究目的：以壳聚糖温敏凝胶为载体,制备一种新型的搭载纳米铁氧体、卡介苗的复合物,构建卡介苗的靶向粘附释放系统,对其表征进行检测,并研究其在膀胱内的生物靶向粘附性、生物学毒性及在动物模型中抗肿瘤诱导效应,探讨其在膀胱内对卡介苗的增效作用。研究方法：1.Fe3O4-CS-BCG复合物的构建：采用化学共沉淀法制备纳米铁氧体作为复合制剂的磁性牵引物,以壳聚糖为基质制备具有粘膜粘附性的温敏凝胶作为卡介苗的载体,最终将纳米铁氧体、壳聚糖及卡介苗相融合,构建出卡介苗靶向粘附释放系统,通过IR、XRD、SEM、TEM及VSM等对其理化性质进行分析。2.Fe3O4-CS-BCG复合物的生物学活性的检测：在外加磁场的条件下,采用冰冻切片方式验证复合物在大鼠膀胱内的靶向粘附性；选取IL-2为指标评价复合物在膀胱灌注后的局部免疫活性：观察其全身毒性反应。3.Fe3O4-CS-BCG复合物抗膀胱肿瘤诱导作用的研究：建立大鼠膀胱癌MNU诱导模型,利用Fe3O4-CS-BCG复合物进行膀胱灌注,拮抗其肿瘤诱导效应,通过检测尿液中TRAIL的浓度、对肿瘤组织进行HE染色及Ki67免疫组化染色、流式细胞仪检测肿瘤凋亡等方法评估其抗肿瘤诱导效应。研究结果：1.合成的Fe304-CS-BCG复合物呈灰黑色,凝胶状。电镜下观察,卡介苗及纳米铁氧体驻留于壳聚糖的网格状结构中,形态,性质稳定。卡介苗及纳米铁氧体装载后复合物仍具有磁响应性,磁性靶向作用良好。2.冰冻切片下观察,复合物在磁场作用下与膀胱壁粘附紧密,在膀胱内的滞留时间可达72小时；复合物膀胱灌注后IL-2浓度呈逐渐升高态势,膀胱内免疫炎症反应强于普通卡介苗,免疫活性高；应用后各组大鼠肝肾功、血常规等指标未见明显异常,心肝肾病理检查未见明显病理损害,证明其全身毒性反应较小,应用较安全。3.在抗大鼠膀胱肿瘤诱导的研究中,大鼠灌注Fe3O4-CS-BCG复合物后,尿液中TRAIL浓度较普通卡介苗组明显升高,所诱导出的肿瘤分级及增殖程度较低,而肿瘤凋亡率较高,各项实验结果基本一致。Fe3O4-CS-BCG复合物较普通卡介苗具有更强的抗肿瘤活性。研究结论：本实验中成功制备以壳聚糖为载体、以纳米铁氧体为磁性牵引物的Fe3O4-CS-BCG复合物,经检测性质稳定,磁响应性较好；在外加磁场作用下,可在大鼠膀胱内产生明显的靶向粘附作用,时间长达72小时,延长了卡介苗在膀胱内的作用时间；与普通卡介苗相比,同等剂量条件下可较普通卡介苗在膀胱内产生更强的免疫作用；应用后全身毒性反应较小。其抗膀胱肿瘤诱导效果优于普通卡介苗,诱导肿瘤凋亡的作用更强。我们认为以壳聚糖温敏凝胶为载体搭载纳米铁氧体、卡介苗后,增强了卡介苗的免疫活性及抗肿瘤效应,为卡介苗的应用提供了新的思路,有望成为用于膀胱癌术后灌注预防膀胱癌复发的更好的免疫制剂。