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二斑叶螨Tetranychus urticae(Koch)和朱砂叶螨T.cinnabarinus(Boisduval)同属蛛形纲Arachnida、蜱螨亚纲Acari、真螨目Acariformes、叶螨科Tetranychidae、叶螨属Tetranychus,广泛分布于世界各地,它们不但危害果树,还危害各类经济作物、林木、温室栽培植物和观赏植物等,是农林生产中重要的害螨种类。前者自从1983年进入中国后,目前分布于中国东北、华北、西北及苏皖两省北部,危害多种果树及经济植物,在山东、辽宁、陕西等省已上升成为果树的第一大害螨,严重威胁果树业生产;后者是我国分布最广、发生最严重的一种农业害螨,在各地严重危害棉花、豆类、桑、木薯、木瓜、瓜类以及林木、温室栽培植物和多种观赏植物,对寄主植物产生机械伤害和毒害作用,引起植物减产和品质下降。由于二者扩散迅速、世代周期短、发育进度快、繁殖能力强,所以极易在新的环境定殖,形成新的地理种群。本文采用DNA序列分析法,分别对采自中国不同地区的二斑叶螨与朱砂叶螨的线粒体DNA COI基因序列以及核糖体DNA ITS2序列进行比较,分析二斑叶螨和朱砂叶螨各地理种群间的分子遗传结构,并对二者之间在分子水平上的差异进行深入探讨。 一、试验材料的采集和饲养 在全国范围内选择较有代表性的地区分别对二斑叶螨和朱砂叶螨进行采样,二斑叶螨采集于全国13个省、市、自治区,朱砂叶螨采集了27个地理种群,采集的生境主要是果园、花圃和蔬菜地。实验室内采用隔水法在菜豆(Phaseolusvulgaris L.)叶片上进行恒温恒湿隔离饲养,饲养条件为25±1℃,L16:D8,相对湿度60%。 二、测定COI和ITS2的序列,并对各不同地理种群进行比较 mtDNA是研究分子遗传和分子进化的一种重要模式体系,各基因区域被广泛用于分析昆虫不同分类水平的系统发育关系,其中细胞色素氧化酶Ⅰ(COI)基因经常被用来分析亲缘关系较近的种、种下分类阶元以及地理种群之间的系统关系。核糖体DNA(rDNA)第2内转录间隔区(ITS2)中度保守,在昆虫和螨类的近缘种区分上应用较多。借鉴别的昆虫或蜱螨的mtDNA中COI以及核糖体DNA的ITS2的测定方法,测定所有种群的COI和ITS2序列。每个地理种群随机抽取3~5个样本进行序列测定,以它们的一致序列为准。