【摘 要】
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目的:旨在探讨猪红细胞类Ⅰ型补体受体（Erythrocyte complement receptor type 1-like,ECR1-like）免疫粘附功能是否能够促进猪肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophages,PAMs）捕获致敏基因工程菌GFP-E.coli,以期阐释猪红细胞免疫分子机理及红细胞免疫在机体先天免疫中的作用。方法:1)构建粘附有致敏GFP-E.col
【基金项目】
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国家自然科学青年基金项目（31702221）； 山西省高等学校科技创新项目（2019L0364）；
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目的:旨在探讨猪红细胞类Ⅰ型补体受体（Erythrocyte complement receptor type 1-like,ECR1-like）免疫粘附功能是否能够促进猪肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophages,PAMs）捕获致敏基因工程菌GFP-E.coli,以期阐释猪红细胞免疫分子机理及红细胞免疫在机体先天免疫中的作用。方法:1)构建粘附有致敏GFP-E.coli的猪红细胞与PAMs动态互作研究体系,体外观察并记录PAMs移除免疫粘附在猪红细胞表面的GFP-E.coli的过程;2)利用流式细胞术、菌落平板计数及RT-PCR技术检测被PAMs捕获的GFP-E.coli的水平,分析猪ECR1-like免疫粘附对PAMs捕获GFP-E.coli的影响;3)利用流式细胞术、细胞免疫荧光化学技术检测猪ECR1-like免疫粘附的致敏GFP-E.coli被PAMs移除后,猪红细胞免疫粘附功能的变化及猪ECR1-like数量的变化。结果:1)显微镜观察显示:猪红细胞与PAMs在体外流动互作状态下,猪ECR1-like免疫粘附在红细胞表面的致敏GFP-E.coli被转移至PAMs,PAMs上绿色荧光逐渐减弱并消失;2)流式细胞术检测发现PAMs捕获游离GFP-E.coli的空白对照组PAMs平均荧光强度为207488.60±1405.65,猪红细胞粘附组PAMs平均荧光强度可显著提高至297655.94±14833.96（P＜0.001）,空白对照组PAMs阳性细胞率为86.49±1.53%,红细胞粘附组PAMs阳性细胞率可显著提高至90.74±1.07%（P＜0.05）;菌落涂板计数发现空白对照组PAMs捕获GFP-E.coli情况为111666±25927 CFU/m L,红细胞粘附组PAMs捕获GFP-E.coli情况可显著增强至203333±4713 CFU/m L（P＜0.05）;RT-PCR检测发现,红细胞粘附组PAMs中GFP-E.coli的相对数量显著高于空白对照组（P＜0.01）;进一步阻断猪红细胞表面的CR1-like,流式细胞术检测发现PAMs平均荧光强度降低至256301.56±9208.85（P＜0.001）,PAMs阳性细胞率降低至88.32±0.92%（P＞0.05）,菌落平板计数发现PAMs捕获GFP-E.coli情况减弱为136666±8818 CFU/m L（P＜0.05）,RT-PCR检测发现PAMs中GFP-E.coli的相对数量显著减少（P＜0.01）;3)细胞流动循环互作结束后,取猪红细胞再次免疫粘附致敏GFP-E.coli,平均荧光强度由循环前2892.18±47.76降至2407.43±141.78（P＜0.05）,阳性细胞率由循环前20.58±0.36%降至17.39±0.23%（P＜0.001）,粘附水平显著低于循环前;4)用CR1-like单抗及荧光二抗标记猪红细胞表面的CR1-like,试验组循环后猪ECR1-like平均荧光强度由循环前344.33±37.92降低至291.56±11.99（P＜0.05）,阳性细胞率由30.20±1.24%减少至28.27±0.64%（P＜0.05）。结论:在体外流动状态下,猪ECR1-like通过其免疫粘附功能促进了PAMs对致敏GFP-E.coli的捕获。PAMs移除猪红细胞表面粘附的致敏GFP-E.coli后,猪红细胞的活性CR1-like减少,免疫粘附功能下降。
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