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目的哺乳动物的大脑皮层是由I-VI层特异性锥体神经元组成的多层结构,这些神经元是由脑室区域的放射状胶质细胞(Radial glial cells,RGCs)经过不对称分裂产生的,并且它们的产生以及迁移有一个明确的时间顺序和空间排布。大脑皮层神经元的生成是一个由内而外的生成模式:早期生成的神经元经过迁移位于皮层深层,而晚期生成的神经元定位在皮层浅层。但目前调控皮层神经元产生的分子机制尚不是很清楚。Transcriptional coactivator with PDZ-binding motif(TAZ),是一个基于PDZ结合基序的转录共激活因子,其通过调控干细胞的增殖、分化与凋亡参与干细胞的分化和多器官的形成。本论文主要探索TAZ在大脑皮层发育中的调控作用。方法1、收集C57/BL6小鼠胚胎各时期(E12、E14、E16、E18)及P0(出生当天)的脑组织冰冻切片,利用免疫荧光染色及Western blot技术检测TAZ在皮层的表达位置及表达水平的情况。2、TAZ-/-胎鼠脑体积与同窝TAZ+/+胎鼠脑体积的对比,检测敲除TAZ对大脑体积的影响。3、通过免疫荧光染色的方法,用放射状胶质细胞(RGCs)marker(Pax6)检测放射状胶质细胞的变化情况,用中间前体细胞(IPCs)marker(Tbr2)来检测中间前体细胞的变化情况。4、5-溴-2′-脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2′-deoxyuridine;Brd U)可以标记正在进行DNA复制的细胞,用它的相应抗体Brd U通过免疫荧光的方法检测神经干细胞的增殖情况,用处在细胞周期中的细胞的标志蛋白Ki67以及有丝分裂期的标志蛋白PH3(Phospho-histone H3)通过免疫荧光染色再次检测神经干细胞的增殖情况。5、用Pax6/Tbr2分别和Brd U双标,检测放射状胶质细胞和中间前体细胞的增殖情况。6、用Brd U和Ki67双标的免疫荧光技术检测细胞周期出口以及S期的长度。7、用皮层各层神经元的特异性蛋白Tbr1(标记第VI神经元)、Ctip2(标记第V层神经元)以及Cux1(标记II-IV层神经元)通过免疫荧光技术检测各层神经元的变化情况。用星形胶质细胞标志蛋白GFAP、BLBP通过免疫荧光技术检测星形胶质细胞的变化。结果1、TAZ在E12至P0各个时期均在小鼠脑组织中有表达,且表达水平随胚胎年龄增高呈逐渐上升趋势。2、TAZ基因敲除导致小鼠大脑体积减小。3、TAZ基因敲除导致RGCs细胞数目增加。4、TAZ基因敲除引起RGCs细胞周期S期增长、细胞周期出口的降低,从而促进RGCs的增殖。5、TAZ基因敲除导致深层神经元产生延迟。结论敲除TAZ基因会使RGCs细胞周期S期的长度变长,从而导致RGCs细胞不能按时跳出细胞周期去分化为神经元,进而造成深层神经元产生延迟,最终导致胚胎小鼠大脑体积减小。TAZ在大脑皮层发育过程中起着重要作用。