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目的:探讨辅酶 Q10（Coenzyme Q10,CoQ10）对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）所致肾脏纤维化的保护作用及其机制。方法:体外实验:1.人肾近端小管上皮细胞（HK-2细胞）在DMEM培养基中培养,造模组（H2O2组）给予500μmoL/L H2O2,分别加入不同浓度CoQ10（5μmoL/L和10μmoL/L）、RIP抑制剂（Nec-1及GSK872）预处理1小时,再与H2O2共孵育24小时,CoQ10-10μM加入ICG001 10μmoL/L预处理1小时后再与H2O2共孵育24小时。2.使用细胞增殖毒性检测法（CCK-8）和MTT法检测各组细胞存活率。3.流式细胞术检测（1）H2O2诱导的HK-2细胞活性氧（ROS）的产生;（2）H2O2诱导的HK-2细胞线粒体超氧化物（Mitochondrial superoxide,MitoSOX）的荧光强度;（3）H2O2诱导的HK-2细胞的坏死性凋亡。4.免疫印迹法检测（1）RIP/RIP3/MLKL信号轴相关蛋白表达;（2）细胞焦亡相关因子（IL-1β、IL-18和NLRP3）的表达;（3）Wnt/β-catenin/GSK信号通路相关蛋白的表达。5.使用XF24细胞外通量分析仪检测细胞耗氧率（OCR）和ATP生成。体内实验:1.构建UUO模型,选择30只7周龄（体重250～260g）SPF级SD雄性大鼠随机分为5组（每组6只）,（1）假手术组（sham组）:仅暴露左侧输尿管后重新缝合皮肤;（2）UUO组:左侧输尿管结扎7天;（3）UUO+CoQ10组:UUO 大鼠给予 CoQ10（20mg/kg/day）灌胃 7 天;（4）UUO+Nec-1 组:UUO 大鼠给予 Nec-1（2mg/kg/day）灌胃 7 天;（5）UUO+GSK872 组:UUO大鼠给予GSK872（1 mg/kg/day）腹腔注射,各组给药共7天。7天后收集各组大鼠24小时尿液,使用全自动尿液分析仪检测24h尿蛋白（Urinary protein,UPRO）;右侧颈内静脉采血,使用全自动生化分析仪检测血肌酐（Serum creatinine,Scr）及血尿素氮（Blood urea nitrogen,BUN）。2.病理学检查:（1）取大鼠肾脏组织,常规固定、石蜡包埋和切片（厚4um）,行HE染色观察肾组织的病理改变;（2）Masson染色结果采用彩色图像自动分析仪定量分析肾间质纤维化程度（Tubulointerstitial fibrosis,TIF）;（3）取肾组织用2.5%中性戊二醛固定,Epon812纯树脂包埋切片,在电镜（Electron Microscope,EM）下观察肾组织细胞的超微结构变化;（4）使用TUNEL染色法观察肾小管上皮细胞的凋亡;（5）利用免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）染色法观察肾组织中外胚层发育不良抗体（Ectodermal Dysplasial,ED-1）及8—羟基脱氧鸟苷（8-Hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG）的表达。3.使用免疫印迹法检测肾组织中（1）转化生长因子-β1（Transforminggrowth factor-β1,TGF-β1）;（2）坏死性凋亡相关蛋白:蛋白激酶 1（Receptor-interacting protein-1,RIP1）、蛋白激酶 3（Receptor-interacting protein-3,RIP3）、混合系列激酶区域样蛋白（Mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL）;（3）细胞焦亡相关蛋白:Nod 样受体热蛋白（NOD-like receptor pyrin domain-containing protein 3,NLRP3）、白细胞介素 1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素 18（Interleukin-18,IL-18）;（4）氧化应激相关蛋白:锰超氧化物歧化酶（Manganese superoxidedismutase,MnSOD）、NADPH 氧化酶 4（NADPHOxidase4,NOX-4）;（5）线粒体调控蛋白:视神经萎缩蛋白1（Opticatrophy 1,OPA1）、琥珀酸脱氢酶 A 亚基（Succinate dehydrogenase A,SDHA）、PINK 1/Parkin;（6）内质网应激相关蛋白:CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein-homologuous protein,CHOP）、肌醇需要酶 1α（Inositol requiring enzyme 1α,IRE-1α）、人类X一盒结合蛋白1（X box binding protein 1,XBP1）;（7）细胞凋亡相关蛋白:B 淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma2,Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl2-associated X,Bax）;（8）Wnt/β-catenin/GSK信号通路相关蛋白的表达。4.利用ELISA法检测各组大鼠尿液中8-OHdG的含量。结果:体外实验:1.CoQ10以浓度依赖的方式提高H2O2诱导的HK-2细胞存活率（P＜0.05）,减少H2O2诱导的HK-2细胞凋亡（P＜0.05）。2.暴露于H2O2的HK-2细胞内的ROS和MitoSOX的产生明显增多,CoQ10以浓度依赖的方式减少H2O2诱导的HK-2细胞内ROS和MitoSOX的产生（P＜0.05）。3.H2O2处理组耗氧率明显下降,CoQ10与RIP抑制剂组（Nec-1及GSK872）耗氧率高于H2O2处理组,ATP和基础呼吸率增加,最大呼吸率和储备呼吸能力提高（P＜0.05）。4.CoQ10和RIP抑制剂（Nec-1及GSK872）可抑制H2O2诱导的HK-2细胞RIP1-RIP3-MLKL相关蛋白的表达（P＜0.05）。5.H2O2诱导的HK-2细胞中IL-1β、IL-18、NLRP3蛋白的表达显著升高（P＜0.01）,CoQ10或RIP抑制剂（Nec-1及GSK872）可明显下调H2O2诱导的 HK-2 细胞 IL-1β、IL-18、NLRP3 蛋白的表达（P＜0.05）。6.H2O2激活了 Wnt/β-catenin/GSK信号通路相关蛋白的活性,CoQ10可抑制H2O2诱导的HK-2细胞Wnt/β-catenin/GSK信号通路相关蛋白的活性（P＜0.05）,加入Wnt/β连环蛋白抑制剂（ICG001）可进一步抑制H2O2诱导的HK-2细胞Wnt/β-catenin/GSK信号通路相关蛋白的活性（P＜0.05）。体内实验:1.与sham组比较,UUO组、CoQ10和RIP抑制剂（Nec-1及GSK872）组大鼠均表现为体重下降（P＜0.05）。2.与Sham组相比,UUO组大鼠肾脏表现为肾小管明显坏死和空泡化、肾小管萎缩、肾小管上皮细胞和间质肿胀,炎症细胞浸润,胶原纤维沉积。与UUO组比较CoQ 10组和RIP抑制剂组（Nec-1及GSK872）大鼠肾脏肾小管坏死及空泡化程度减轻,炎症细胞浸润减少,胶原纤维沉积减少。3.EM结果显示UUO组肾小管上皮细胞严重坏死、肾小管上皮细胞肿胀、微绒毛脱落,CoQ10和RIP抑制剂组（Nec-1及GSK872）肾组织超微结构有不同程度改善;UUO组线粒体的结构破坏,线粒体数量明显减少、体积变小、嵴断裂、局灶空泡化、线粒体变形（融合）、线粒体分裂成两个子细胞器和吞噬体形成,CoQ10组这种线粒体解剖完整性的丧失减轻,并保留了线粒体的数量和大小（P＜0.05）;UUO导致粗面内质网核糖体剥离、囊泡池断开和扩张,CoQ 10组和RIP抑制剂组（Nec-1及GSK872）粗面内质网上述改变减轻。4.UUO组的TIF评分明显高于sham组（P＜0.01）,而CoQ10或RIP抑制剂组（Nec-1及GSK872）的TIF评分较UUO组降低（P＜0.05）;与UUO组相比CoQ10组和RIP抑制剂组TGF-β1的表达降低（P＜0.05）。5.与UUO组相比CoQ10和RIP抑制剂组（Nec-1及GSK872）可显著抑制RIP1-RIP3-MLKL信号传导相关蛋白的过度表达（P＜0.05）。6.UUO组大鼠肾间质有大量的巨噬细胞（ED-1阳性细胞）浸润,UUO组ED-1阳性细胞数明显增加（P＜0.01）,CoQ10和RIP抑制剂组（Nec-1及GSK872）ED-1阳性细胞数明显减少（P＜0.05）;UUO组IL-1β、IL-18和NLRP3的表达增加,CoQ10组和RIP抑制剂组明显抑制IL-1β、IL-18和NLRP3的表达（P＜0.05）。7.UUO组大鼠肾组织中8-OHdG的表达明显增多（P＜0.01）,而CoQ10组和RIP抑制剂组（Nec-1及GSK872）与UUO组比较8-OHdG的表达降低（P＜0.05）;与UUO组比较CoQ10组尿液中的8-OHdG的浓度明显降低（P＜0.05）;CoQ10通过上调MnSOD和下调NOX4的表达来清除氧化应激（P＜0.05）。8.CoQ10可逆转UUO组OPA1、SDHA、PINK1和Parkin蛋白的异常表达（P＜0.05）。9.TUNEL染色结果显示,TUNEL阳性细胞的凋亡小体主要位于肾小管上皮细胞及间质纤维化区域,凋亡细胞表现为核染色质致密,胞质浓缩。与sham组比较,UUO组大鼠TUNEL阳性细胞数明显增加（P＜0.01）,与UUO组比较CoQ10和RIP抑制剂组（Nec-1及GSK872）TUNEL阳性细胞数明显减少（P＜0.05）。10.CoQ10抑制内质网应激调控蛋白（CHOP、IRE-1α、XBP1S）的表达（P＜0.05）;与 UUO 组比较 CoQ10 和 RIP 抑制剂组（Nec-1 及 GSK872）Bcl-2/Bax比值升高（P＜0.05）。11.UUO组Wnt/β-catenin/GSK信号通路相关蛋白的活性增加（P＜0.01）,与 UUO 组比较CoQ10 组和 RIP抑制剂组（Nec-1 及 GSK872）Wnt/β-catenin/GSKK信号通路相关蛋白的活性降低（P＜0.05）。结论:1.辅酶Q10通过抑制RIP1-IP3-MLKL介导的坏死性凋亡从而改善肾间质纤维化。2.辅酶Q10改善肾间质纤维化可能与减少氧化应激和保护线粒体紧密相关。3.减少内质网应激和细胞凋亡可能是辅酶Q10肾保护作用机制之一。4.辅酶Q10保护肾脏的作用机制与其干扰Wnt/β-catenin/GSK信号通路有关。