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在世界范围内,前列腺癌的发病率在所有男性恶性肿瘤中位居第二位,死亡率在男性恶性肿瘤中位居第六位。前列腺癌发病率有明显的地域和种族差异,发达国家发病率高于发展中国家。亚洲前列腺癌的发病率虽然远远低于欧美国家,但近年来呈上升趋势,且增长比欧美发达国家更为迅速。早在1941年,雄激素剥夺治疗(ADT)便作为前列腺癌的主要治疗方式,通过阻碍雄激素与雄激素受体结合从而达到治疗目的。但这种治疗方式存在一个问题：一部分经过ADT治疗的激素依赖性前列腺癌(ADPC)经过1-2年的标准治疗后转变为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。在此过程中,研究发现肿瘤细胞的化疗抵抗、转移、侵袭及复发能力增强,这可能与肿瘤干细胞(CSCs)增多和上皮-间质转化(EMT)的发生密切相关。然而有关此方面的证据仍较少。第一部分ADT激活TGF-β1信号通路目的：探讨ADT与TGF-β1信号通路的关系方法：1.研究人群分为三组：ADPC、ADT和CRPC组。2.免疫组化检测上述三组中TGF-β1表达。结果：三组结果比较,在CRPC组肿瘤标本中,TGF-β1表达增高。结论：ADPC经ADT治疗后转变为CRPC的过程中激活了TGF-β1信号通路。第二部分TGF-β1诱导EMT发生的同时增加了CD44的表达目的：研究TGF-β1对EMT和CD44的作用方法：体外培养激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)和去势抵抗性前列腺癌细胞株(CWR22RV1),经TGF-β1(5ng/ml)分别刺激上述细胞后,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测0、3、6、9小时CD44、p-Smad2和Smad2的表达水平；应用Western blot分别检测0、12、24、36、48小时E-cadherin、 vimentin的表达水平。结果：1.TGF-β1增加了CD44的表达。2. TGF-β1对EMT的发生有促进作用。结论：TGF-β1诱导EMT发生的同时增加了CD44的表达。第三部分TGF-β1通过调节CD44诱导EMT目的：TGF-β1诱导EMT机制的研究方法：1.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,将上述细胞分别分为四组。先将SB431542(TGF-β1受体抑制剂)加入第三、第四组,2小时后再向第二、第四组加入TGF-β1(5ng/ml),3小时后提取蛋白,应用Western blot检测四组中CD44、 p-Smad2和Smad2的表达水平。2.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,将上述细胞分别分为三组：对照组、实验组1、实验组2。向对照组转入sicontrol质粒,向实验组1转入siCD44质粒处理24小时,向实验组2转入siCD44质粒处理48小时,分别提取蛋白,应用Western blot检测三组中CD44表达水平。3.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,将上述细胞分别分为四组。先将sicontrol质粒转入第一、第二组,将siCD44质粒转入第三、第四组,48小时后向第二、第四组加入TGF-β1(5ng/ml),24小时后分别提取蛋白,应用Western blot分别检测CD44、E-cadherin和Vimentin表达水平。结果：1.在LNCaP和CWR22RV1细胞中,单加TGF-β1组与对照组比较CD44表达水平明显增高；单加SB431542组和SB431542、TGF-β1两者都加组分别与对照组比较,CD44表达水平无明显改变。2.在LNCaP和CWR22RV1细胞中,转染质粒后CD44表达水平由高到低依次为转入sicontrol质粒组、转入siCD44质粒处理24小时组、转入siCD44质粒处理48小时组。3.在LNCaP和CWR22RV1细胞中,单加TGF-β1组与对照组比较,CD44和Vimentin表达水平增高,E-cadherin表达水平降低；转入siCD44质粒组和转入siCD44质粒、TGF-β1两者都加组分别与对照组比较,CD44、Vimentin表达水平降低、E-cadherin表达水平增高。结论：TGF-β1通过上调CD44表达水平诱导EMT的发生。第四部分前列腺癌鼠模型建立和体内靶向抑制CD44阻碍前列腺癌转移目的：建立前列腺癌鼠模型并体内研究靶向抑制CD44与前列腺癌转移的关系。方法：1.体外培养LNCaP和CWR22RV1细胞,用盐霉素(salinomycin)分别处理0、24、48小时后分别提取蛋白,应用Western blot检测CD44表达水平。2.建立前列腺癌鼠模型,随机分为实验组(腹腔注射盐霉素)和对照组(腹腔注射玉米油)。取原位瘤及转移灶,比较两组间转移情况。3.免疫组化检测上述两组CD44、E-cadherin和Vimentin表达水平。结果：1.盐霉素抑制CD44表达。2.实验组转移灶数量明显少于对照组。3.实验组CD44、Vimentin表达水平低于对照组,E-cadherin表达水平高于对照组。结论：体内靶向抑制CD44有效阻碍前列腺癌转移和EMT的发生。