IRF1与IFN-β协同调节M1巨噬细胞极化及其抗肿瘤效应

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目的:初步探讨IRF1与IFN-β协同调节M1巨噬细胞极化的机制及其抗肿瘤效应。方法:用PMA,IFN-γ及LPS将U937单核系肿瘤细胞诱导成经典极化的巨噬细胞(M1),流式细胞术检测M1/M2表面标志物CD86及CD206,荧光定量PCR及ELISA分别检测M1/M2相关细胞因子:IL-12p35、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、TNF-α及IL-10。用中和性单抗及siRNA-IFNB1/siIRF1两种方法将IFN-β中和,或IFNB1或IRF1干扰后,检测內源性IFN-β以及IRF1对M1巨噬细胞极化的影响,同时荧光定量PCR,Western blot及ELISA检测IRF1、IFN-β和IRF5的表达情况。以条件培养基(CM)分别培养肝癌细胞系SMCC-7721和HepG2,用CCK8检测肝癌细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测肝癌细胞侵袭。结果:用U937构建的M1巨噬细胞模型高表达M1相关标志物IL-12p35、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、TNF-α和CD86(P<0.05),低表达M2表面标志物CD206。阻断IRF1或IFN-β的作用后,与对照组相比,M1相关标志物IL-12p35、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、TNF-α和CD86表达降低(P<0.05),M2表面标志物CD206和IL-10表达升高(P<0.05);阻断IRF1后,IFN-β和IRF5表达降低;阻断IFN-β后,IRF1和IRF5表达降低。用阻断IRF1和IFN-β后的条件培养基(CM-siIFNB1或CM-Ab)培养SMCC-7721和HepG2后,与对照组相比,肝癌细胞的增殖能力和侵袭能力增强,细胞凋亡降低(P<0.05)。结论:在用IFN-γ及LPS诱导而成的U937-M1巨噬细胞模型中,IRF1和IFN-β相互调节,且二者可能共同调节IRF5的表达,进一步促进M1巨噬细胞极化及其抗肿瘤效应。
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