分泌蛋白(Secretory protein)是指细胞或组织分泌到胞外的蛋白,同胞内蛋白一样在参与细胞增殖、分化以及细胞间的信号转导等重要生命过程发挥作用。因此,本课题旨在探索一种新的胞外蛋白提取分析的方法,通过对酿酒酵母胞外蛋白组学的研究,来揭示连续衰老培养条件下酿酒酵母胞外蛋白组学的变化,从酵母胞外蛋白组学的角度阐述酿酒酵母的衰老现象。本文选取双向电泳技术作为蛋白组学分析的主要技术,此项技术应用到酵母胞外蛋白组学的难点在于样品的准备阶段。故以双向电泳图谱质量为参考选取硫铵沉淀法、冻干-平衡酚法、超滤法对培养三天的酵母胞外蛋白进行提取。从最优的图谱选择对应的方法,优化电泳条件建立一种适用于双向电泳分析的酵母胞外蛋白提取方法。结果表明冻干-平衡酚法提取后得到114个蛋白点,提取率为73.67%,图谱识别的蛋白点最多图谱最清晰,是研究分泌类蛋白质组学理想的分离方法其次是超滤法和硫铵沉淀法,因为处理过程中有过多的盐分对双向电泳不利。最终利用建立的对酵母胞外分泌蛋白的研究方法研究了在持续衰老培养条件下酵母胞外蛋白的变化情况。结果表明在连续衰老情况下胞内抗氧化酶活性降低,细胞内蛋白酶活性升高,酵母胞外蛋白分泌量增加。质谱分析表明胞外蛋白中有部分内源蛋白碎片排出。内源蛋白碎片可能与细胞内蛋白酶活性升高相关,胞内―垃圾‖蛋白被水解成碎片排出到胞外。