脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)检测方法的研究

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是镰刀菌产生的一种真菌毒素,主要污染谷物及其制品。食用污染毒素的谷物,如病麦及其制成品后会引起人畜中毒,还有致癌、致畸和诱变的作用。谷物往往是通过产毒真菌的感染而污染毒素的,如小麦赤霉病,是影响我国南方麦区、东北春麦区以及黄淮流域麦区的重要病害,可由多种镰刀菌引起,但主要致病种是禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)。镰刀菌引起小麦的穗腐,不仅使小麦籽粒产量降低、品质变劣,而且病麦粒中存留有病菌产生的真菌毒素,如脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON),但是我国相关的研究比较少,特别是检测水平偏低。因此,对我国禾谷镰刀菌产毒特点进行分析,并改进毒素检测方法,对我国麦制品中真菌毒素含量进行日常化的和标准化的检测,并发布相关毒素污染情况是非常必要的。 本论文对DON的快速检测进行了研究,建立并比较了理化检测方法和免疫学检测方法,主要研究内容和结果如下: 1、为了获得大量DON,将禾谷镰刀菌菌株进行了产毒培养。结果发现,禾谷镰刀菌在约含25%水的小麦培养基中,25℃,振荡培养30天,产毒量最高; 2、DON的提取试验结果表明,小麦样品宜用乙腈-水(84:16,V/V)提取,硅镁型吸附剂柱净化; 3、建立了薄层层析(TLC)检测DON的方法:以展开剂氯仿:甲醇(90:10)展开DON毒素的Rf值约为0.45,DON在365nm紫外光下显蓝色荧光,经20%硫酸喷雾并加热后,DON样点呈玫瑰红或玫瑰紫色; 4、建立了高效液相色谱紫外分析(HPLC-UV)检测DON的方法:以kromasil C-18分析柱(4.6×250mm)为固定相,乙腈-水(84:16)为流动相,流速为0.8mμL/min,进样量为20μL,紫外检测波长为218nm,毒素DON的检测谱峰峰形清晰明显,无干扰,保留时间为8分钟左右。该法最低检出限为0.1ng/μL,线性范围为0.1-10ng/μL; 5、建立了气相色谱-质谱联用(GC-MS)检测DON的方法:毒素经C18/Al2O3柱(1/3)滤去色素,用三甲基硅烷基衍生剂TMS衍生化,然后以DB-5MS石英交联毛细管柱(30cm×0.25mm×0.25μm)为固相,纯氦气为载气,流速为1mL/min进行气相色谱;以EI为离子源,扫描间歇1.0s进行质谱分析,特异性好,结果稳定,而且用GC-MS与HPLC检测DON浓度误差不显著; 6、建立了薄层层析(TLC)的定性检测及高效液相色谱(HPLC)的定量检测相结
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