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刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa,简称S.spinosa)经有氧发酵后可产生一种杀虫活性高、杀虫谱广、对非靶标动物无杀伤作用的大环内酯类抗生素—多杀菌素(spinosad)。本文对菌株ASAGF W2进行物理诱变结合抗生素抗性筛选,目的是获取适合工业化生产的刺糖多孢菌菌种。应用抗生素抗性筛选方法选育多杀菌素产量有大幅提高的刺糖多孢菌,采用两种途径向出发菌株ASAGF W2引入低浓度链霉素(Streptomycin,简称Str)、庆大霉素(Gentamicin,简称Gen)、氯霉素(Chloramphenicol,简称Chl)和利福平(Rifampicin,简称Rif)的多重抗性,途径一是将多种抗生素的抗性通过含有抗生素的平板逐级引入,标记为非GYM组;由于纯培养和纯种是决定突变效果的关键问题,因而途径二是将分离的抗性突变株进行平板划线分离纯培养之后再通过含有抗生素的平板引入下一种抗性,标记为GYM组。结果通过五轮摇瓶发酵培养的筛选验证,从774株突变株中获得1株遗传性状稳定的高产突变株13-8-1,多杀菌素平均发酵产量比出发菌株提高了23.87%,其筛选来源是抗生素组合Str0.5 Gen10的双重抗性筛选。以菌株ASAGF 13-8-1为出发菌株,通过多功能等离子体诱变系统(Multifunctional Plasma Mutagenesis System,简称MPMS)诱变结合抗生素组合Str0.9Gen14和Chl2Gen14Rif400Str0.9的多重抗性筛选。结果通过五轮摇瓶发酵培养的复筛验证从576株突变株中获得1株遗传性状稳定的高产突变株14-2,多杀菌素平均发酵产量比出发菌株提高28.68%,其筛选来源是MPMS诱变结合抗生素组合Chl2Gen14Rif400Str0.9的四重抗性筛选。本文建立了应用物理诱变结合抗生素抗性筛选多杀菌素高产菌的方法,最终筛选到1株突变株ASAGF 14-2多杀菌素摇瓶发酵产量比出发菌株ASAGF W2累计提高52.55%,实验效果显著,为快速获取适合工业化生产的多杀菌素高产菌具有重要的指导意义。