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“黄藿散”是由补气固本作用的黄芪和温肾壮阳功效的淫羊藿按照一定的比例组成的一个纯中药复方。为探讨该方的免疫促进作用以及该方超微粉促免功效与传统粗粉的差异,本试验将98只昆系小鼠随机平均分为14组。即,①正常小鼠高、中、低剂量微粉及粗粉中药组,②免疫抑制小鼠高、中、低剂量微粉及粗粉中药组,③正常以及免疫抑制小鼠生理盐水对照组。免疫抑制小鼠用氢化可的松腹腔注射造模。各组连续灌服6d后,分别检测小鼠的脾指数、胸腺指数、外周血白细胞总数、炭粒廓清指数、脾内抗体形成细胞(AFC)分泌抗体的功能、血清溶血素含量、迟发型超敏反应(DTH)以及外周血T细胞亚群(CD4+/CD8+)和血清TNF-α含量的变化情况。结果表明,一定剂量的“黄藿散”对正常以及免疫抑制小鼠的脾指数、胸腺指数、外周血白细胞总数和碳粒廓清指数均有显著的提高作用,且微粉显著优于粗粉;“黄藿散”对正常小鼠的AFC分泌抗体的功能无明显影响,但一定剂量的“黄藿散”对正常小鼠的血清溶血素水平以及免疫抑制小鼠AFC分泌抗体的功能和血清溶血素水平均有显著的提高作用,且微粉显著优于粗粉;“黄藿散”对正常和免疫抑制小鼠足趾变态反应、外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群的比例以及正常小鼠的血清TNF-α的含量均有一定的促进和提高作用,但与粉体的粒度和剂量有关,微粉低剂量即可达到粗粉中或高剂量的效果。提示“黄藿散”对小鼠非特异性免疫功能、体液免疫功能和细胞免疫功能具有一定的增强作用,且微粉优于粗粉。
为探讨“黄藿散”微粉对小鼠促免功效优于粗粉的机理,本试验应用激光粒度仪和扫描电镜对微粉的粒度和破壁情况进行了观测,并与普通粗粉进行了比较。此外,还应用称重法、蒽酮-硫酸法以及高效液相色谱法分别比较分析了微粉与粗粉的总浸出物、有效成分多糖以及淫羊藿苷溶出率的差异。结果发现黄芪和淫羊藿经超微粉碎后,粉体的粒度分布中心D50分别为6.82μm和8.40μm,经电镜观察均难以看到完整的细胞形态,破壁率远远大于普通粗粉;药物的总浸出物和有效成分多糖以及淫羊藿苷的提取率均显著高于普通粗粉。
分别将0.25%、0.5%、1%、1.5%的“黄藿散”微粉和粗粉给免疫新城疫及禽流感疫苗后的雏鸡添加,并连续检测各组鸡ND和AIH9抗体的变化情况。结果发现,黄藿散粗粉和微粉的各个剂量水平对雏鸡的ND抗体和AIH9抗体水平均有一定的提高作用。其中,0.5%微粉组的效果最好,最高使ND抗体和AIH9抗体较NS对照组分别提高1.6和3.2个滴度,显著优于粗粉中效果最好的1%和1.5%剂量组。提示,黄藿散微粉可作为ND和AI疫苗的免疫增强剂在生产中应用,且较普通粗粉节约药量1/3-1/2以上。