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前言芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)是基本螺旋-环-螺旋家族的配体依赖性转录因子,通常作为传感器响应环境变化。有文献指出,在非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease)患者的血清中AHR的含量升高,除此之外,有文献指出AHR还调控代谢活化酶细胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α)的表达。CYP1A1是氧化应激的关键酶,TNF-α是胰岛素抵抗的关键酶。氧化应激和胰岛素抵抗是NAFLD形成的两个关键原因,被称为“二次打击”。因此说AHR在NAFLD的形成过程中起到重要作用。α-萘黄酮(alpha-naphthoflavone,ANF)可以抑制AHR的表达。因此本研究将通过体内和体外实验的方法来探讨AHR与NAFLD之间的关系以及抑制AHR是否可以治疗NAFLD。目的通过查阅最近十年发表的相关文献,本研究将通过体内和体外实验来验证AHR与NAFLD之间的关系。方法为了研究AHR在NAFLD形成过程中的作用,本研究将通过体内和体外实验的方法来研究在NAFLD发展过程中AHR、CYP1A1、TNF-α的表达变化。在体内实验中,本实验将以高脂饲料喂养的C57BL小鼠NAFLD模型作为研究对象。在体外实验中,本实验将以油酸(oleic acid,OA)诱导人肝癌细胞(Hep G2细胞)作为细胞脂质堆积模型来进行研究。1.体内实验中AHR、CYP1A1、TNF-α的表达变化购买4周鼠龄的清洁级C57BL雄性小鼠24只,体重20-22g。在芳香烃受体在非酒精性脂肪肝病形成过程中的作用机制研究实验中,高脂饲料喂养4周的小鼠作为NAFLD模型组,正常饲料喂养的小鼠作为正常组,AHR抑制剂(白藜芦醇)加高脂饲料喂养的小鼠作为抑制剂组,AHR激动剂(苯并芘)加高脂饲料作为激动剂组。在AHR为靶点的非酒精性脂肪肝病治疗作用研究实验中,正常组与模型组与上述实验相同,将不同给药剂量的ANF作为不同的抑制剂组。所有小鼠的给药方式皆为灌胃。高脂饮食喂养四周,给药四周。2.体外实验中AHR、CYP1A1、TNF-α的表达变化在AHR在NAFLD形成过程中的作用机制研究实验中,OA诱导Hep G2细胞24小时作为细胞脂质堆积模型组,正常细胞作为正常组,白藜芦醇加OA作为抑制剂组,苯并芘加OA作为激动剂组。在以AHR为靶点的NAFLD治疗作用研究实验中,正常组与模型组均与上述实验相同,选择ANF作为AHR的抑制剂,以不同浓度的ANF作为不同的抑制剂组。在实验过程中OA刺激时间为24h,药物刺激时间为24h。在AHR沉默实验中,将正常细胞为控制组,空白RNA转染为正常组,空白RNA加OA为模型组,AHR的干扰RNA加OA作为si-RNA组,OA刺激时间为24h。实验结束以后提取细胞蛋白和细胞上清备用。结果在AHR在NAFLD形成过程中的作用机制研究实验中,对小鼠血清和细胞中的AST、ALT、TC和TG含量进行检测后发现,AST、ALT、TC和TG的含量高低依次为:激动剂组、模型组、抑制剂组、正常组。蛋白表达结果显示,CYP1A1和TNF-α的蛋白表达高低依次为:激动剂组、模型组、抑制剂组、正常组,对小鼠肝脏进行HE染色和对细胞进行油红染色结果显示脂肪堆积程度依次为:激动剂组、模型组、抑制剂组、正常组。说明增加AHR的表达加重肝损伤,减少AHR的表达减轻肝损伤。在以AHR为靶点的NAFLD治疗作用研究实验中,对小鼠血清和细胞中的AST、ALT、TC和TG进行检测后发现,模型组中的AST、ALT、TC和TG含量最高,随着药物浓度的提高AST、ALT、TC和TG含量逐渐降低。蛋白表达结果显示,模型组的AHR、CYP1A1和TNF-α蛋白表达最高,随着药物浓度的升高蛋白表达逐渐降低。肝脏和细胞染色结果显示模型组脂肪堆积最多,随着药物浓度的升高脂肪堆积逐渐降低。在AHR的细胞沉默实验中,模型组中的AST、ALT、TC和TG含量均高于si-RNA组。蛋白表达结果显示模型组中的AHR、CYP1A1和TNF-α蛋白表达均高于si-RNA组。油红染色结果显示模型组中的脂质堆积高于si-RNA组。因此可以说抑制AHR的表达可以减轻肝损伤。结论本研究指出AHR通过调节CYP1A1和TNF-α的表达,影响NAFLD的发展。说明AHR在NAFLD的形成过程中起到关键作用