灰葡萄孢是一种气传性植物病原真菌,它能够侵染200多种植物,包括番茄、草莓、葡萄以及多种花卉。灰葡萄孢的抗逆性极强,可靠菌核或分生孢子度过恶劣环境。研究灰葡萄孢菌核发育、分生孢子产生或致病机理可为有效防治灰霉病奠定理论基础。本研究以灰葡萄孢菌丝生长时期和菌核发育时期的基因表达谱为基础,挑选出了2个在这两个阶段基因表达量差异较大的基因BC1G₀0689和BC1G₀3293,并初步研究了它们的功能,取得了以下研究结果:1.RNA-seq结果表明基因BC1G₀0689在菌核发育时期表达下调,表达量是菌丝生长时期的18%,该基因编码一个包含酸性鞘磷脂酶结构域的蛋白质。基因BC1G₀3293在菌核发育时期表达上调,表达量比菌丝生长时期上调了78倍。该基因编码的蛋白质与大肠杆菌中周质空间麦芽糖结合蛋白的结构相似度较高,目前在真菌中还没有相关蛋白质功能的报道。为了研究基因BC1G₀0689的功能,我们通过同源重组的方法得到了敲除转化子△BC1G₀0689-19和△BC1G₀0689-21。也得到了基因BC1G₀3293的敲除转化子△BC1G₀3293-2和△BC1G₀3293-4,并运用基因互补技术得到了互补转化子△BC1G₀3293-2-C2和△BC1G₀3293-2-C3。2.敲除转化子△BC1G₀0689-19和△BC1G₀0689-21的菌落形态、菌丝尖端形态、菌丝生长速度、对番茄叶片的致病力以及菌核干重与野生菌株B05.10相比无明显差异,但敲除转化子的产孢量明显下降,约为出发菌株B05.10产孢量的70%。结果说明BC1G₀0689基因在灰葡萄孢产孢过程中可能发挥重要作用。3.BC1G₀3293基因敲除后产孢量明显下降,大约为出发菌株B05.10产孢量的45%,并且BC1G₀3293基因互补可使敲除转化子的产孢量得到明显恢复。在加麦芽糖和蔗糖的基本培养基上敲除转化子的菌丝生长速度、菌落形态以及菌核干重与B05.10相比无明显区别。结果说明BC1G₀3293基因参与调控了灰葡萄孢的分生孢子产生。