合欢皮对小鼠的抗焦虑作用研究

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目的:观察合欢皮对小鼠焦虑行为的影响及其机制,并对合欢皮抗焦虑的有效部位进行认识。方法:通过正交实验设计研究合欢皮水提液抗焦虑最佳提取工艺。通过小鼠行为学实验,观察合欢皮水提液、醇提液对小鼠焦虑行为的影响,并通过酶联免疫吸附法测定小鼠脑内神经递质含量来探究合欢皮水提液、醇提液对小鼠抗焦虑机制行为影响;通过对合欢皮水提液及醇提液进一步的萃取分离,萃取出不同的活性部位,经行为学实验来探究合欢皮抗焦虑的活性部位;①高效液相色谱法测定合欢皮中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量。②通过三因素三水平正交实验设计来探究合欢皮水提液最佳工艺。③合欢皮水提液抗焦虑实验:雄性小鼠,灌胃给予不同剂量的合欢皮水提液,连续灌胃5d,然后在小鼠高架十字迷宫,明暗箱上观察合欢皮水提液对小鼠焦虑行为的影响。行为学实验结束后在冰台上取小鼠全脑用万分之一天平称重,采用酶联免疫吸附法测定小鼠脑内γ-氨基丁酸、谷氨酸和5-羟色胺递质含量。④合欢皮醇提液抗焦虑实验:雄性小鼠,灌胃给予不同剂量的合欢皮醇提液,连续灌胃5d,然后在小鼠高架十字迷宫,明暗箱上观察合欢皮醇提液对小鼠焦虑行为的影响。⑤合欢皮抗焦虑有效部位研究:取合欢皮水提液及醇提液分别用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取,用萃取物分别做抗焦虑行为学实验研究。行为学结束后采用酶联免疫法测定小鼠脑内γ-氨基丁酸、谷氨酸和5-羟色胺递质含量。⑥高效液相色谱法测定合欢皮正丁醇部位(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量。结果:①合欢皮抗焦虑水提液最佳工艺为10倍量的水,提取2次,每次1.5h。②合欢皮水提液各剂量组均对小鼠焦虑行为有一定的抗焦虑作用,其中合欢皮水提液中剂量组(2.5mg/kg)与焦虑模型组比较在高架十字迷宫开臂滞留时间百分比(%)(OT%),开臂进入次数百分比(%)(OE%)及穿箱次数上(TT)上均有显著性,合欢皮水提液中剂量组对焦虑小鼠的行为有一定的干预作用。与焦虑模型组比较,地西泮阳性组与合欢皮水提液中剂量组均可提高小鼠脑内GABA含量(P<0.05);与焦虑模型组比较,地西泮阳性组与合欢皮水提液组均可降低小鼠脑内Glu含量(P<0.05);与焦虑模型组比较,阳性组可显著降低小鼠脑内5-HT含量(P<0.01),合欢皮水提液中剂量组可降低小鼠脑内5-HT含量。③合欢皮醇提液中剂量组在开臂滞留时间百分比(%)(OT%)与焦虑模型组比较显示出显著性差异(P<0.05),其余组并未表现出显著性差异。④在开臂滞留时间百分比(%)(OT%)上,与焦虑模型组比较,阳性组、合欢皮水提液组、水提乙酸乙酯组、水提正丁醇组、合欢皮醇提物组、合欢皮醇提物正丁醇萃取物组均有显著性差异(P<0.05);在开臂进入次数百分比(%)(OE%)上,与焦虑模型组比较,阳性组、合欢皮水提液组、合欢皮水提正丁醇萃取组、合欢皮醇提正丁醇萃取组均有显著性差异(P<0.05);在穿箱次数(次)(TT)上,与焦虑模型组比较,仅阳性药物组有显著性差异(P<0.05)。⑤合欢皮醇提正丁醇中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷含量高于水提正丁醇。结论:①合欢皮抗焦虑水提液最佳工艺为10倍量的水,提取2次,每次1.5h。②合欢皮水提液有明显的抗焦虑作用,其抗焦虑作用机制与降低小鼠脑Glu、5-HT含量,提高脑内GABA含量有关。③合欢皮醇提液抗焦虑作用效果不佳。④合欢皮正丁醇部位有明显的抗焦虑作用,其抗焦虑作用机制与降低小鼠脑Glu、5-HT含量,提高脑内GABA含量有关。木酯素类化合物可能为其抗焦虑有效成分。
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