【摘 要】
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目的以淋巴瘤生物标志物电化学免疫传器检测面临的检测复杂、灵敏度较低和多为单靶标分析等问题为切入点,选取双表达淋巴瘤的生物标志物C-myc和Bcl-2蛋白为目标物,拟从稳定的识别元件固定载体、信号标志物及二者的协同信号扩增着手,建立系列具有较高灵敏度、稳定性和选择性的单一和联合淋巴瘤生物标志物的电化学免疫传感新方法,为生物样本中痕量物质识别及定量检测提供高效、精密、准确的方法学基础,有效提高淋巴瘤检
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目的以淋巴瘤生物标志物电化学免疫传器检测面临的检测复杂、灵敏度较低和多为单靶标分析等问题为切入点,选取双表达淋巴瘤的生物标志物C-myc和Bcl-2蛋白为目标物,拟从稳定的识别元件固定载体、信号标志物及二者的协同信号扩增着手,建立系列具有较高灵敏度、稳定性和选择性的单一和联合淋巴瘤生物标志物的电化学免疫传感新方法,为生物样本中痕量物质识别及定量检测提供高效、精密、准确的方法学基础,有效提高淋巴瘤检测的敏感性和检出率,为人群样本的筛查与检测提供新思路。方法论文设计采用吸附法、介体还原法制备系列协载合金。经场发射扫描电镜（FESEM）、透射电镜（TEM）、能量色散X射线光谱（EDS）、傅里叶红外光谱（FT-IR）进行微观形貌表征、元素及活性基团分析;差分脉冲伏安法（DPV）进行电化学性能研究,遴选电行为优良的PB-Au Pd、TB-Au Pd、MB-Pt Pd和TMB-Pt Pd四种协载合金,并将其作为检测抗体标记物。分别以电沉积合金修饰电极（E-Au Pd/GCE）、碳基合金粒子修饰电极（CS-GO-Au Pd/GCE）、电聚合修饰电极（PEDOT-GO-MWCNTs/GCE）作为传感界面以固载捕获抗体,经抗原-抗体特异性结合,分别对淋巴瘤单一标志物C-myc蛋白、联合标志物C-myc和Bcl-2蛋白进行识别传感检测。通过FESEM对修饰电极进行微观形貌表征,循环伏安法（CV）和电化学阻抗谱（EIS）对传感器的构建过程进行电化学监测,DPV实现对目标物的灵敏检测,经方法学研究和可行性验证对三种传感器的分析性能进行系统研究。结果两种C-myc蛋白电化学免疫传感器的定量检测范围分别是1 pg/m L～1ng/m L和0.5 pg/m L～1 ng/m L,检出限分别为0.5 pg/m L和0.25 pg/m L。同时检测联合标志物的电化学免疫传感器中C-myc和Bcl-2蛋白的线性范围分别是1 pg/m L～1ng/m L和5 pg/m L～1 ng/m L,检出限分别为0.5 pg/m L和2.5 pg/m L。经系统方法学研究和可行性验证证实三种传感体系有较好的稳定性、重现性和选择性,并分别应用于加标血液样品中的检测,回收率均在95.3%～107.7%之间,RSD<4.1%。结论论文将合金粒子同时应用于电极修饰和信号标签,基于双合金的协同扩增信号技术构建的新型C-myc蛋白电化学免疫传感器,展示出与已报道的研究相媲美甚至更好的分析性能。优选介体还原法制备的不同协载合金粒子作为信号标签,基于作为酶模拟物的纳米合金无酶催化体系的信号放大策略实现检测信号的互不干扰和有效扩增,达到同时检测C-myc和Bcl-2蛋白的目的。在多种加标样品的目标物检测中有满意的回收率,证实所构建的系列电化学免疫传感器在实际检测中有良好的应用潜能。在保证灵敏度的同时实现联合标志物的分析,有望作为辅助工具提高淋巴瘤诊断的特异性。
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