猪妊娠早期子宫和胎儿发育与PPAR-γ蛋白的表达定位

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本研究利用组织形态学方法对母猪不同妊娠时期的子宫、胎儿及胎盘进行了观测;采用免疫组织化学方法,检测并分析了母体胎盘中PPAR-γ的表达定位;利用细胞免疫荧光与细胞增殖实验技术,检测了PPAR-γ激动剂作用下猪脐带静脉内皮细胞的生长增殖情况,获得了以下结果:1.母猪妊娠期间子宫及胎儿发育的眼观变化受孕25天和40天的妊娠子宫显著增长增粗显著增长增粗,妊娠子宫角长度随着胎儿数的多少变动在90-173cm范围。羊膜囊和尿羊膜囊已发育,胎儿形体已基本形成。妊娠25天发育胎儿体重的变异程度达到13.1%;妊娠70天发育胎儿体重和体长的变异程度分别达到24.5%和9.5%,胎儿个体间体重的差异程度大于体长的差异程度。2.猪妊娠子宫及胎盘组织学观察妊娠25天在子宫黏膜弯曲部位开始形成似绒毛晕结构;妊娠40天,子宫黏膜增生,较妊娠25天相比,子宫黏膜更为发达和密集,粘膜上皮临近处血管增加。在高倍镜下可观察到子宫黏膜上皮细胞与滋养层细胞的间隙中有分泌物形成的条带。3. PPAR-γ在妊娠25天和妊娠40天母猪胎盘中的表达胎盘组织PPAR-γ免疫组织化学实验结果表明,在妊娠25天,PPAR-γ主要在腔上皮细胞呈现强阳性标记,在母体血管呈弱阳性标记,在腺体上几乎没有标记;妊娠40天,PPAR-γ在腺体内皮上和腔上皮细胞上呈现强阳性标记,母体血管呈现或强或弱的阳性标记.这表明,在妊娠25天左右,PPAR-γ在腺细胞上没有表达,在妊娠40天左右,腺细胞上才开始表达PPAR-γ,而在妊娠40天内,在腔上皮细胞和母体血管上PPAR-γ均有表达。4.猪脐带静脉内皮细胞体外培养实验原代的猪血管内皮细胞刚分离下来时是亮球形,并且多成团存在;细胞贴壁之后,其形态呈现明显的梭形或多角形,中央核突出,单个细胞较少,多数以岛屿形式存在,当细胞长至单层时,呈现典型的“铺路石”状排列。5. PPAR-γ激动剂罗格列酮对猪脐带静脉内皮细胞的增殖影响收集妊娠母猪脐带静脉内皮细胞,对脐带静脉内皮细胞进行体外培养、纯化和传代,进行鉴定后,分别使用2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的PPAR-y激动剂罗格列酮作用于猪脐带静脉内皮细胞,分别与培养6小时、12小时和24小时时用酶标仪测于450nm处测吸光光度值,发现浓度为5μmol/L的激动剂罗格列酮对于静脉内皮细胞有较为明显的促进生长和生长的作用。
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