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压疮(PU)是临床常见的严重并发症,好发于长期卧床、坐轮椅、年老体弱、脊髓损伤、脑血管疾病和活动受限等患者。近年来,在临床和社区工作中,由于患者内部和外部因素以及照顾者对压疮的认知不足等多方面的影响,难免性压疮的发生不可避免,若进一步发展为深度压疮则形成慢性难愈合创面。慢性创面的治疗一直是困扰临床医护工作者的重点和难点,因此探讨压疮慢性难愈合创面的分子机制,可以为临床压疮的防治提供新的科学思路。
目的:通过研究炎症因子IL-1β、TNF-a、胶原纤维、生长因子VEGF、bFGF及其受体KDR、FGFR1和细胞凋亡因子Caspase-3在Ⅲ、Ⅳ期压疮慢性难愈合创面中的分布规律及表达特征,探讨他们与压疮形成的相关性,深入了解压疮的分子机制,为晚期压疮的临床治疗提供理论依据和新的思路。
方法:收集临床Ⅲ、Ⅳ期压疮患者共21例共23处创面,包括压疮边缘组织和压疮中心组织,急性外伤患者14例,正常皮肤6例,将以上创面组织分为四组:压疮中心组、压疮边缘组、急性创面组、正常皮肤组。通过HE染色观察不同创面组织的形态学特征;胶原染色法分析不同创面组织中胶原分布及表达的特点;免疫组织化学法检测组织中VEGF、bFGF、Caspase-3的分布规律;荧光定量PCR法定量分析IL-1β、TNF-a、生长因子VEGF、bFGF及其受体KDR、FGFR1基因水平的变化特征。
结果:
1、通过HE染色见压疮边缘组织和中心组织中大量炎性细胞的浸润,急性创面中有少量炎性细胞分布,而正常皮肤组织分布规律整齐。通过荧光定量Q-RT-PCR法定量分析炎症因子IL-1β,TNF-a在不同创面组织的表达规律,结果表明压疮边缘组织中表达量最高,压疮边缘组和压疮中心组中的表达量均高于急性创面组,正常皮肤组织中表达较低,差异有统计学意义。
2、通过Masson染色方法对不同创面进行胶原染色,可见胶原纤维在压疮边缘组织和中心组织中的表达较少甚至消失,急性创面中有部分表达,而正常皮肤组织中有大量的胶原纤维的分布。
3、通过免疫组织化学方法检测压疮组织中生长因子VEGF、bFGF阳性颗粒主要分布在成纤维细胞、血管内皮细胞中。在压疮中心组中的表达量分别为100.24±39.16、131.55±45.61;在压疮边缘组织中表达量表达分别为228.71±48.33、298.83±79.88;压疮中心组与压疮边缘组相比,差异有统计学意义,P值均小于0.01。在急性创面中VEGF、bFGF阳性颗粒主要表达于成纤维细胞中,其表达量分别为292.26±59.2、443.31±193.73;急性创面组与压疮创面组相比,差异有统计学意义,P<0.05或P<0.01。正常皮肤组VEGF、bFGF表达较少,分别为45.18±18.47、54.11±22.34,与两个压疮组和急性创面组比较,差异有统计学意义,P值均小于0.01。通过荧光定量PCR方法在基因水平上对VEGF、bFGF及其他们的受体KDR、FGFR1在不同创面中的表达规律进行研究,结果显示VEGF、bFGF基因表达水平同蛋白表达一致,而受体的基因表达有所不同于生长因子,KDR、FGFR1在急性创面中表达最高显著高于压疮组,而正常组高于压疮中,即由高至低依次为急性创面组、正常皮肤组、压疮边缘组、压疮中心组,差异有统计学意义。
4、通过免疫组织化学法检测压疮中凋亡因子Caspase-3阳性颗粒主要分布在成纤维细胞、血管内皮细胞。在急性创面中的阳性颗粒主要表达于成纤维细胞和血管内皮细胞中,正常皮肤中阳性颗粒表达极少。通过积分光密度半定量分析,Caspase-3在压疮中心组织中的表达量最高,其余依次为压疮边缘组织、急性创面组织和正常皮肤组织。
结论:
1、压疮创面中炎症反应的过度和过长时间的表达,有可能阻碍了创面的愈合,此外胶原纤维表达减少或消失也是影响愈合的重要因素。
2、生长因子及其受体在压疮中的表达显著低于急性创面组织,不能达到正常愈合的所需量,可能是创面难愈合的重要原因。
3、压疮创面中存在着细胞过度凋亡的现象,有可能阻碍或延迟了创面愈合。