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目的:构建人PIG11逆转录病毒载体,建立高表达PIG11基因的HepG2细胞株,为进一步研究PIG11基因在肝癌细胞中的功能及促凋亡作用提供一个理想的试验平台。观察PIG11基因高表达对HepG2细胞凋亡的影响。方法:将已有的pcDNA3.1/NT-GFP-PIG11质粒用PCR法扩增出PIG11片段,经过酶切、T4 DNA聚合酶连接等步骤将该片段重组入pLXSN逆转录病毒载体中,构建含人PIG11 cDNA的重组质粒pLXSN-PIG11。重组载体经PCR鉴定和DNA测序分析。将该重组质粒用lipofectamineTM2000转染包装细胞PA317,获得pLXSN-PIG11逆转录病毒液。用病毒液感染NIH3T3细胞,检测病毒滴度。再用病毒液感染HepG2细胞,G418筛选,获得PIG11高表达的HepG2细胞株。应用RT-PCR和Western Blot检测经感染后HepG2细胞的PIG11表达。对成功感染PIG11基因的HepG2细胞应用HE染色、DNA Ladder以及流式细胞仪检测等方法测定PIG11在HepG2中高表达时对该细胞凋亡的影响。结果:成功构建了pLXSN-PIG11逆转录病毒载体,测序证明PIG11cDNA编码序列与GenBank中报道的一致。转染PA317细胞后病毒释放,经检验病毒滴度为1×105cfu/ml。用含病毒上清液感染HepG2细胞,经RT-PCR和Western Blot检测证实HepG2细胞中PIG11 mRNA及PIG11蛋白表达明显升高。高表达PIG11的HepG2细胞从形态学上可观察到凋亡细胞增多,有明显的DNA Ladder条带。流式细胞仪检测显示感染PIG11的HepG2细胞凋亡率为41.13%±2.29%,明显高于未处理组细胞的凋亡率3.33%±0.81%和感染空载体细胞的凋亡率3.53%±0.40%,且差异有显著性(P<0.01)。结论:成功构建了逆转录病毒载体pLXSN-PIG11,获得稳定高表达PIG11蛋白的HepG2细胞株;PIG11蛋白高表达能明显促进HepG2细胞凋亡。