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目的:研究CYP2E1在酒精协同游离脂肪酸刺激下对巨噬细胞炎症反应的影响。方法:1.利用慢病毒转染RAW264.7细胞和小鼠肝脏原位灌注、梯度离心分别获得RAW264.7-CYP2E1过表达细胞系和CYP2E1基因敲除的小鼠肝脏巨噬细胞,通过Real-TimePCR和Western-blot检测过表达细胞和巨噬细胞中CYP2E1 mRNA和蛋白表达。2.使用酒精与游离脂肪酸刺激三种细胞,建立酒精与游离脂肪酸协同增效性细胞模型,并将三种细胞都分为四组:(1)对照组(C组);(2)酒精组(A组);(3)游离脂肪酸组(F组);(4)酒精+脂肪酸组(AF组),其中酒精浓度为50mM,游离脂肪酸浓度为0.5mM。3.通过油红染色检测经酒精及游离脂肪酸刺激后细胞内脂肪变情况。4.通过Real-TimePCR检测CYP2E1、TNF-α、一氧化氮合成酶(iNOS)和I型精氨酸酶(Arg1)mRNA表达。结果:通过慢病毒转染RAW264.7细胞成功建立了CYP2E1高表达的RAW264.7-CYP2E1过表达细胞系,却未能成功提取小鼠肝脏巨噬细胞,Real-TimePCR和Western-blot结果显示过表达细胞CYP2E1基因在mRNA和蛋白水平显著高于RAW264.7细胞(p<0.01)。通过对两种细胞酒精与游离脂肪酸刺激发现:(1)酒精、游离脂肪酸单独或协同作用均能引起两种细胞不同程度的脂肪变,其OD值较对照组均有显著差异(p<0.05);(2)CYP2E1基因能增强巨噬细胞对游离脂肪酸的敏感性,在游离脂肪酸刺激下细胞内CYP2E1基因转录水平升高极显著(p<0.01),并且出现酒精与游离脂肪酸的协同效应(p<0.01);(3)炎症因子TNF-α的mRNA在过表达细胞中各处理组的表达量均显著高于RAW264.7对照组细胞(p<0.05);且各处理组显著高于未刺激的细胞(p<0.01);(4)在过表达细胞中,酒精及游离脂肪酸均能显著提高巨噬细胞iNOS基因的表达(p<0.05,p<0.01),且表现出协同效应。相反,Arg1基因的mRNA表达量却明显下调(p<0.01)。同时iNOS/Arg1的比例,在酒精及游离脂肪酸的刺激下明显升高(p<0.01)。结论:在CYP2E1基因的影响下,酒精及脂肪酸能使巨噬细胞M1/M2表达与活化失衡,氧化应激与氮化应激加剧,细胞M1型极化增多,促炎性反应增强。