GPC3在不同转移侵袭能力的肝细胞癌细胞株的表达及其与4E-BP1和PS6K的相关性研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qtjqty
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目的检测三种不同转移能力的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞系的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、真核细胞启动因子4E结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体S6蛋白激酶(PS6K)的m RNA和蛋白表达情况,并根据生物信息学分析探讨这三种基因与不同的肝细胞癌细胞转移及侵袭能力的相关性。方法分别采用荧光定量PCR和Western blotting方法检测人正常肝细胞系HL-7702、低转移力肝细胞癌细胞系MHCC-97L、高转移力肝细胞癌细胞系MHCC-97H GPC3 m RNA和蛋白表达水平、4E-BP1m RNA和蛋白表达水平、PS6K的m RNA和蛋白表达水平的表达情况,用R语言具体分析三种蛋白与肝细胞癌(HCC)转移侵袭能力的相关性。结果在线网站cbioportal分析GPC3、4E-BP1、PS6K表达异常的HCC患者与正常表达该基因的HCC患者的预后效果具有显著性差异(p值分别为0.0281、1.18e-7、0.0119),整体生存率和生存周期均降低。荧光定量PCR结果显示,与HL-7702细胞系相比,MHCC-97H细胞表达的GPC3和PS6K m RNA水平显著高于HL-7702(P<0.05),而MHCC-97L细胞表达的GPC3 m RNA水平显著升高且有统计学差异(P<0.05),PS6K的m RNA水平虽略有升高但没有显著性差异。4E-BP1的m RNA水平表达量从高到低依次为HL-7702、MHCC-97L、MHCC-97H,且与HL-7702组相比,均有显著性差异(*P<0.05)。MHCC-97H与MHCC-97L相比,GPC3和PS6K m RNA水平显著升高,4E-BP1 m RNA的表达则显著降低(P<0.05)。Western blot结果也显示,与MHCC-97L相比,MHCC-97H细胞表达的GPC3和PS6k蛋白水平显著升高且有统计学差异(P<0.05),相反,4E-BP1的蛋白水平表达量从高到低依次为HL-7702、MHCC-97L、MHCC-97H。根据Western blot实验得到的蛋白表达量的数值,经R语言编程进行相关性矩阵分析以r>0.7为正相关,r<-0.7为负相关。在三种细胞系中,PS6k与GPC3蛋白表达均呈正相关,相关系数R值均大于0.8,4E-BP1与GPC3蛋白表达呈负相关,相关系数R值均小于-0.8,PS6k与4E-BP1蛋白表达呈负相关,相关系数R值均小于-0.8。结论在三种细胞系中,GPC3和PS6K的m RNA和蛋白水平随着转移能力的增强而升高,PS6K与GPC3表达呈正相关。4E-BP1的表达则随着转移侵袭能力的增强而受到抑制,与GPC3的表达呈负相关,并且这三种蛋白的表达情况均与HCC转移侵袭能力的增强密切相关。
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