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背景与目的卵巢癌(Ovarian Cancer,OC)是女性生殖器常发恶性肿瘤之一,由于早期无特异性临床症状,绝大多数患者发现时已经进入晚期,五年生存率极低。卵巢上皮癌约占原发性卵巢癌的90%,其发生发展机制复杂。血管生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF)等可通过促进肿瘤组织内血管生成参与多种肿瘤的进程,新生血管为肿瘤细胞的生长提供必要的营养支持。肿瘤的生长、迁徙转移及临床分级均与血管生成相关。然而促血管生成因子在卵巢癌尤其在卵巢上皮癌患者中的表达如何,如何参与卵巢上皮癌的发展,仍需深入探讨。前期,我们发现卵巢上皮癌症患者外周血血清PDGF增高,在此基础上,我们进一步采用酶联免疫法(ELISA)检测不同临床分期的卵巢上皮癌患者外周血血清PDGF含量,并分析其与临床分期的相关性;采用实时定量PCR(qPCR)检测卵巢上皮癌患者癌组织及癌旁组织PDGF mRNA表达;采用免疫组化法检测卵巢上皮癌患者癌组织及癌旁组织PDGF蛋白表达。为了验证实验结果,我们在体外条件下以卵巢上皮癌细胞系OVCAR-3为模型,补充不同浓度PDGF,采用Transwell法和MTT比色法分别检测PDGF对OVCAR-3迁徙及增殖能力的影响。材料与方法1.采用酶联免疫法(ELISA)检测20例对照者及12例Ⅰ期、16例Ⅱ期、18例Ⅲ期、21例Ⅳ期卵巢上皮癌患者外周血血清PDGF含量,分析血清PDGF含量与卵巢上皮癌临床分期的相关性。2.采用实时定量PCR(qPCR)和免疫组化法分别检测25例卵巢癌患者癌组织及癌旁组织PDGF mRNA和蛋白的表达。3.在体外条件下以卵巢上皮癌细胞系OVCAR-3为模型,补充不同浓度PDGF,采用Transwell法和MTT比色法分别检测PDGF对OVCAR-3迁徙及增殖能力的影响。结果1.健康对照组外周血血清PDGF浓度为(118.95±25.31)pg/ml,卵巢上皮癌患者PDGF浓度分别为Ⅰ期(168.50±23.11)pg/ml、Ⅱ期(193.06±22.34)pg/ml、Ⅲ期(202.61±23.62)pg/ml、Ⅳ期(249.57±32.41)pg/ml。健康对照组低于各期卵巢上皮癌患者组,且有统计学差异(p<0.05)。随着卵巢上皮癌症临床分期的增加,血清PDGF含量呈现上升趋势。2.与健康对照组相比,卵巢上皮癌患者外周血血清PDGF含量不仅随临床分期的增加而增高,且与临床分期呈现明显正相关(r=0.859,p<0.0001)。3.25例卵巢上皮癌患者年龄为(52.84±11.73)岁,其癌旁组织PDGF mRNA相对表达量为(1349.32±203.64)倍,而癌组织PDGF mRNA相对表达量为(1664.20±187.41)倍,经过配对t检验分析发现,卵巢上皮癌患者癌组织PDGF mRNA相对表达量明显高于癌旁组织,且有统计学差异(p<0.0001)。4.显微镜下观察卵巢上皮癌组织可见新生血管丰富,血管内皮细胞呈单层分布,管壁薄,血细胞充满管腔。癌细胞呈簇状分布,形成生发中心,癌细胞细胞核高度异形性,胞质多,胞核大而染色质疏松,核仁多见,提示癌细胞呈高度增生状态。5.癌旁组织PDGF阳性信号平均密度为(0.27±0.12)C,癌组织PDGF阳性信号平均密度为(1.63±0.43)C,经过配对t检验分析发现,卵巢上皮癌患者癌组织PDGF蛋白表达量明显高于癌旁组织,且有统计学差异(p<0.001)。6.未加入PDGF蛋白组穿过生物膜OVCAR-3细胞数为(0.88±0.13)个/mm~2,加入低浓度PDGF组穿过生物膜细胞数为(1.40±0.18)个/mm~2,加入高浓度PDGF组穿过生物膜细胞数为(2.03±0.33)个/mm~2。经过方差分析发现,与为空白组相比,低浓度PDGF和高浓度均能有效诱导细胞迁移,且和加入PDGF浓度呈现依赖性(均有p<0.05)。7.未加入PDGF蛋白组OD490吸光度为(0.19±0.07),加入低浓度PDGF(100 pg/ml)和加入高浓度PDGF(300 pg/ml)组OD490吸光度分别为(1.10±0.17)和(2.37±0.26),采用方差分析发现加入PDGF组均高于空白对照组,高浓度PDGF组OD490吸光度高于低浓度PDGF组,且均有统计学差异(均有p<0.0001)。结论1.卵巢上皮癌患者外周血血清PDGF增高且与疾病分期呈正相关,患者癌组织PDGF mRNA及蛋白均较癌旁组织高。2.在体外条件下,PDGF可促进卵巢癌细胞系OVCAR-3的增殖和迁移,在一定范围内呈现浓度依赖性。