重组生长激素对手术创伤和腹腔感染时白蛋白合成率影响的研究

被引量 : 4次 | 上传用户:shuper
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
第一部分示踪技术测定白蛋白合成率相关方法的建立目的:完善白蛋白提纯和水解等方法;确定苯丙氨酸在气相色谱质谱联用仪GC/MS下检测条件和分析方法;建立稳定性同位素示踪剂测定白蛋白合成速率的方法。方法:1.血清白蛋白采用三氯乙酸/乙醇法提纯,SDS-PAGE鉴定纯度,Bradford法定量;采用HPLC法对水解液氨基酸进行定量,固相萃取法对苯丙氨酸衍生前进行处理。2.应用MSTFA对氨基酸进行衍生化,选取庚烷作为溶剂,GC自动进样1ul。3.与谱库进行对比,确定衍生化产物的特征片段,对质核比M+5,M+2和M+0的积分面积进行比较,确定相对丰度表达方法。4.白蛋白合成率分数测定用标准曲线法,再根据随时间推移白蛋白和前体池中同位素相对丰度TTR的变化,计算FSR。结果:对提纯后血浆白蛋白进行SDS-PAGE,发现在66KD处有纯度较高条带;Bradford法测定白蛋白浓度为0.9mg/ml;HPLC法测定水解液中氨基酸浓度为0.6umol/L;衍生化产物为化产物为N,O-双三甲基硅烷基-L-苯丙氨酸和N,O-双三甲基硅烷基-[2H5]-L-苯丙氨酸;选取质核比197/194作为相对丰度TTR指标;前体池中苯丙氨酸TTR在输注实验后1h达到平台期,此时并入白蛋白苯丙氨酸TTR的增加成线性,基于此计算出的正常新西兰兔在给予肠外营养情况下的白蛋白合成率分数为17.26±0.92(n=8)。结论:1.白蛋白的提纯和水解方法以及氨基酸衍生化方法达到测定白蛋白FSR的要求。2.用于测定稳定性同位素示踪剂的GC/MS条件稳定,分析数据方法可靠。3.稳定性同位素示踪剂[2H5]-L-苯丙氨酸测定白蛋白合成率分数的方法可行,为进一步评估手术和感染等应激时白蛋白合成速率变化提供技术支持。第二部分生长激素对手术创伤和腹腔感染时白蛋白合成率的影响目的:改良盲肠结扎穿孔的新西兰兔模型,建立取血和营养输注途径;通过已建立的稳定性同位素示踪技术评估腹腔感染和手术应激对动物白蛋白合成率分数的影响;评估重组人生长激素对腹腔感染持续状态白蛋白合成代谢的作用。方法:1.腹腔感染模型的制作采用改良后的盲肠结扎穿孔法,腹腔感染引流术去除腹腔感染,颈外静脉置管和弹簧固定的方法分别用于取血和营养液的输注。2.新西兰兔随机分为四组,即正常合成率组、假手术组、腹腔感染组和生长激素干预组;腹腔感染组和生长激素干预组在第一次同位素输注实验结束后实施腹腔感染引流术;四组动物均给予全胃肠外营养支持(TPN);分别在术前、术后第1天和第4天对一般指标(体重,血清白蛋白浓度等)进行检测。3.生长激素干预组于第一次输注实验后每晚0:00给予肌肉注射生长激素0.3u/kg,其他组给予安慰剂。4.稳定性同位素标记物[2H5]L-苯丙氨酸注射液经灭菌和除热源处理,根据体重计算给药剂量,将同位素混入肠外营养中经耳缘静脉微量注射泵输入体内。自稳定性同位素输注实验开始后,每小时取血3ml,直至6小时后实验结束。5.白蛋白合成率分数测定用标准曲线法,根据随时间推移并入白蛋白和前体池中同位素相对丰度TTR的变化,计算FSR,并进行组内和组间比较。结果:本研究发现盲肠结扎穿孔术后1天,新西兰兔腹腔粘连较重,肠系膜和肠管充血水肿,腹腔有脓性积液;取血和营养输注方法可有效维持4天以上;对动物体重和血清白蛋白浓度的变化进行了观察,发现腹腔感染组第4天体重和血清白蛋白浓度较术前显著下降(p值分别为0.037和0.001);各组实验动物白蛋白FSR的组内比较,发现生长激素组FSR第4天显著高于第1天(p=0.006);四组实验动物白蛋白FSR的组间比较,发现第1天四组间FSR有差异(F=33.687,p<0.001),其中假手术组、腹腔感染组和生长激素组的FSR均较正常组高(p<0.05);腹腔感染组和生长激素组较假手术组高(p<0.001);第4天四组间FSR差异显著(F=65.794,p<0.001),腹腔感染组高于正常组(p=0.001)和假手术组(p=0.002);生长激素组则高于其他三组(p<0.001)。结论:1.改良后的盲肠结扎穿孔术可有效的形成腹腔感染,取血和输注装置的改良可以满足实验需要。2.手术和腹腔感染应激早期白蛋白合成率加快,两者的叠加效应可将白蛋白合成与分解代谢率推向更高的水平。3.手术和腹腔感染应激持续期白蛋白合成率仍处于高水平,但由于分解速率处于更高水平,机体不能维持此时血清白蛋白的浓度。4.应用重组生长激素3天以上可促进新西兰兔腹腔感染后持续应激状态的白蛋白合成率,对白蛋白代谢失平衡有治疗作用,避免白蛋白浓度的进一步下降。
其他文献
目的:探讨体力活动与绝经后骨质疏松症发病风险的关系以及联系程度;观察结合有氧运动、力量和伸展练习的康复运动处方对防治绝经后骨质疏松症的作用。方法:按照纳入标准和排
商业银行项目贷款评估是对项目贷款取舍和优化的过程,是银行进行项目贷款决策的先决条件和重要步骤。近几年来,针对银行间激烈竞争造成的信贷资产风险加剧,各商业银行越来越
在知识经济的今天,企业竞争情报工作已经越来越受到人们的关注与重视,如何有效评价竞争情报工作的绩效,也是企业决策者关心的问题。因此,建立一套全面、完整、实用的竞争情报
微学习是未来学习不可缺少的一种学习模式。微课程按照新课程标准及教学实践要求,以教学视频为主要载体开展教与学的片段活动。通过对微课程教学理论与初中英语微课程课堂教
本文研究了矩阵变换器的电压、电流控制方法。首先在分析Venturini控制法、瞬时双电压法、空间矢量法等电压控制法的基础上,针对空间矢量法提出了矩阵变换器在非对称输入条件
中学生课业负担过重问题一直困扰着我国基础教育事业的发展,它不仅对中学生身心健康造成很大危害,而且严重影响素质教育的顺利实施。虽然我国采取了一系列措施解决中学生课业
德育课程内容改革是德育新课程改革的重要内容。德育新课程改革实施十多年来,德育课程内容改革的成效如何是一个值得关注的现实问题。调查显示,德育新课程内容改革中存在着活
由第三人履行的合同以担保第三人的履行为合同标的,合同的当事人是债权人和债务人,而非第三人。债务人负担的是担保义务,第三人没有履行或履行不符合约定,即属债务人担保义务
房地产业是我国国民经济的主导产业,在现代社会经济生活中有着举足轻重的地位。据统计,在我国房地产业的资金来源中,银行信贷占到70%以上,房地产贷款余额占商业银行贷款余额
在学校,确实存在着一些学习成绩较差、思想品德或心理不良的“问题学生”。产生这类学生的主要原因不在于学生本身,而是由于学校、家庭、社会的不良影响和教育方法失当。在学