第一部分实验目的：胰岛素样生长因子-1受体(IGF1R)在乳腺癌的发生发展中起着重要作用,目前已成为靶向治疗新的热点方向。然而,IGF1R同预后的相关性长期以来一直存在着争议。本研究将从IGF1R基因拷贝数、基因表达和蛋白表达三个方面来全方位分析这一分子标志物与预后的关系,以期为今后的靶向治疗提供合适的指标。材料与方法：通过对325名原发浸润性乳腺癌患者的肿瘤标本进行包括基因拷贝数、mRNA表达和蛋白表达的全面综合分析,评估IGF1R表达情况与临床病理因素和预后的相关性。结果：IGF1R mRNA水平不仅与蛋白表达相关,还和许多临床病理因素及预后有高度相关性。低组织学分级、腋窝淋巴结阴性、激素受体阳性、Her2阴性、Ki67阴性以及luminal亚型肿瘤显示高表达IGF1RmRNA.在单变量分析中,IGF1RmRNA与较好的RFS和BCSS相关；在多变量分析中,仍然是BCSS的独立预后因子。IGF1R蛋白表达在单变量分析中与延长的BCSS有关。IGF1R基因拷贝数与mRNA或蛋白表达无明显相关性,并且未发现有预后意义。在Luminal肿瘤亚型中,IGF1RmRNA高表达提示更好的BCSS.结论：原发性乳腺癌中IGF1RmRNA和蛋白表达具有相关性,而IGF1RmRNA表达则可以作为预后指标。这些研究结果将为IGF1R靶向治疗提供重要信息。第二部分实验目的：IGF1R被认为在浸润性乳腺癌的发生及发展过程中起到重要作用。本实验通过定量检测浸润性乳腺癌福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)标本中IGF1R的基因含量,来证实FFPE标本是否与冰冻组织(FF)标本检测结果具有相关性,判断其与传统乳腺癌临床病理因素的关联,进而评价其是否可以作为独立的乳腺癌预后分子,并且评估乳腺癌FFPE标本对浸润性乳腺癌诊断治疗的价值。材料与方法：我们收集了77对乳腺癌FF及FFPE标本,用qRT-PCR定量检测两种标本中的IGF1R基因表达量,并判断其是否有关联。此外,我们还应用了一个260例乳腺癌FFPE标本集合去分析乳腺癌FFPE标本中IGF1R基因的定量检测对乳腺癌预后判断的可行性。结果：从95.4%的FFPE标本中提取出的总RNA含量都在30ng/μL以上,而大约有90%的FFPE标本成功实施了基于Taqman探针的实时定量PCR检测。结果表明,IGF1R的表达量在两种标本(FF和FFPE)中有显著的相关性(秩相关系数为0.74),且都与IGF1R的蛋白表达呈正相关。Kaplan-Meier生存曲线表明,IGF1R的mRNA水平越高,病人RFS和BCSS越长。结论：从乳腺癌FFPE标本中定量分析IGF1R基因的含量不但可行,而且还可以为判断浸润性乳腺癌的生物学行为及预后提供可靠依据。第三部分实验目的：前两部分研究结果已经证实乳腺癌中IGF1R mRNA的表达可以作为乳腺癌预后的指标,IGF1R mRNA和蛋白存在明显正相关,但IGF1R mRNA和蛋白表达的调控机制并不清楚。材料与方法：选取不同的乳腺癌细胞株,包括ER阳性和ER阴性的细胞株,检测其IGF1RmRNA和蛋白表达差异；并用IGF-1因子激活IGF1R通路,观察IGF1RmRNA和蛋白表达变化；进一步,采用染色体蛋白免疫共沉淀(ChIP)的方法,检测IGF1R蛋白与IGF1R DNA启动子区域是否结合。结果：ER阳性和ER阴性乳腺癌细胞的IGF1R表达存在明显差异,ER阳性的细胞IGF1RmRNA和蛋白表达明显较ER阴性的细胞高；IGF-1激活IGF1R通路后,可以促进IGF1RmRNA和蛋白表达增高；ChiP结果显示,在不同细胞株内,均发现IGF1R蛋白与IGF1R基因启动子区域的结合。结论：IGF1R的表达与ER状态相关,提示ER可能参与IGF1R的表达；IGF1R蛋白可以通过与自身基因的启动子区域结合,促进IGF1R mRNA转录增多,而mRNA表达上调可能进一步促进蛋白表达增多,从而导致IGF1R的mRNA表达与其蛋白表达成正相关。