金黄地鼠KCNQ1基因的分子克隆及表达分析

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KCNQ1基因是Kcnq基因家族中的一员,同时也是电压门控钾离子通道基因中的一员,作为第一个被鉴定引起心率失调的基因KCNQ1被广泛研究,地鼠不仅是大众型宠物,同时也是非常良好的实验动物,在各个领域都被广泛应用,本论文以金黄地鼠为实验动物,克隆出了KCNQ1基因的cDNA序列,并对克隆出的序列进行了相应分析,同时对KCNQ1基因在金黄地鼠组织与胚胎中的表达进行了分析,旨在为将来KCNQ1基因在人类生理学,遗传学,药理学和病理学的深入研究打下坚实的基础。本论文以金黄地鼠心脏的cDNA为模板,采用了RT-PCR以及RACE扩增的方法克隆出了金黄地鼠KCNQ1基因的cDNA全序列,序列长3050bp,编码669aa,与Genbank上其它物种进行比对结果显示,金黄地鼠的KCNQ1基因的cDNA序列以及氨基酸序列均具有较高的保守性,其中cDNA序列比对结果与大鼠同源性最高位92%,与小鼠同源性为90%,与人同源性为87%。氨基酸序列比对结果显示,与大鼠同源性最高同源性为97%,与小鼠同源性为97%,与人同源性为90%。根据预测出的氨基酸序列,分析了蛋白可能的分子质量为74.68KDa,等电点为9.77。同时预测出了KCNQ1蛋白具有6个横扩膜结构(S1-S6),位置分别是123-146,155-178,198-218,263-283,294-317,331-354。而后又利用软件预测出了KCNQ1蛋白有6个位点可能发生糖基化。通过以上数据,构建了金黄地鼠KCNQ1基因的系统发生树,系统发生树结果显示了金黄地鼠亲缘关系与传统的分类学的结果相一致。以金黄地鼠心、肝、脾、肺、肾组织的cDNA为模板,根据已获得的序列,设计RT-PCR引物,半定量检测KCNQ1基因在金黄地鼠心、肝、脾、肺、肾中均有表达,荧光定量PCR结果显示,KCNQ1在金黄地鼠心脏中表达量最高,在肺脏和肾脏中均有较高表达,在脾脏中低度表达,在肾脏中基本不表达。
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