隐孢子虫鼠基因Ⅰ型的生物学特性和遗传学特征研究

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为研究隐孢子虫鼠基因Ⅰ型(Cryptospotidium mouse genotypeⅠ)的生物学特性和分子特征,从郑州大学基础医学院的试验动物中心收集17-20日龄小鼠的粪便,收集的粪便样品使用蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法进行检查,将隐孢子虫阳性样品混合在2.5%重铬酸钾溶液中保存。隐孢子虫卵囊进行纯化后使用18S rRNA基因测序的方法鉴定为隐孢子虫鼠基因Ⅰ型,然后用于试验中。3只小尾寒羊羔羊、3只荷斯坦犊牛、12只新生小鼠和12只成年小鼠,每只动物均通过强饲法分别经口一次感染1×105个隐孢子虫鼠基因Ⅰ型卵囊。另外同等数量的动物作为不感染的空白对照组。应用蔗糖漂浮法浓缩感染动物粪便中的卵囊,光学显微镜下用血红细胞计数板对每克粪便中的卵囊数量进行计数。测量50个隐孢子虫鼠基因I型卵囊的长和宽并计算其长宽比(卵囊形状指数)。PCR扩增卵囊SSU rRNA和GP60基因片段,并对扩增产物进行测序分析。隐孢子虫鼠基因Ⅰ型成功感染小鼠,但不感染羔羊和犊牛;卵囊大小为4.81-4.84μm×4.05-4.13μm,平均为4.83μm×4.09μm,比微小隐孢子虫卵囊小;卵囊卵囊形状指数为1.18。隐孢子虫鼠基因Ⅰ型在新生小鼠体内的潜隐期为5d,持续感染期是24-28d;在成年小鼠体内的潜隐期为6d,持续感染期是28-29d。虫体寄生于小鼠空肠和回肠的肠微绒毛边缘,以回肠的虫体感染密度最大;在小鼠大肠未发现虫体寄生。在感染有隐孢子虫鼠基因Ⅰ型卵囊的羔羊和犊牛胃肠道中未发现虫体寄生。卵囊的SSU rRNA基因位点测序分析显示,隐孢子虫鼠基因Ⅰ型与其它隐孢子虫种/基因型在遗传上隔离,是一个新的隐孢子虫基因型。GP60基因分析显示,来自与自然感染小鼠、传代小鼠和试验中感染小鼠的卵囊都为隐孢子虫鼠基因Ⅰ型。   综合本研究中获得的隐孢子虫鼠基因Ⅰ型的形态学、一般生物学和分子生物学数据,认为该隐孢子虫是一新的隐孢子虫种并命名为泰泽隐孢子虫(C.tyzzeri),且该隐孢子虫新种可能存在对人类健康的潜在危害。
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