目的:膀胱癌是泌尿系统常见肿瘤,发病率仅次于前列腺癌。虽然膀胱癌的诊治方法在不断改善,但是高复发及进展率仍是影响临床膀胱癌治疗的重要障碍。近些年,多种生物分子被研究证实在膀胱癌的进展中起作用并与患者的预后相关。但是,目前这些分子作为生物靶点的治疗效果及生物标志物的预测作用并不理想。我们的前期实验发现,一种蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶,STK32C的基因在TCGA数据库膀胱癌组织中呈现高表达,并猜测其可能在膀胱癌中起一定的作用。因此,本实验重点探讨了:STK32C蛋白在膀胱癌患者癌组织及癌旁的表达情况。通过体外细胞实验,探讨了STK32C对膀胱癌T24和5637细胞增殖,凋亡,侵袭和转移能力的影响。进一步,初步探究了STK32C在膀胱癌中发挥作用的可能的分子通路。方法:1.首先,收集了TCGA数据库中414例膀胱癌患者的m RNA表达数据及患者的临床信息,通过对数据进行整合分析,对STK32C基因在膀胱癌组织及癌旁的表达量进行比较。2.从临床获得膀胱癌患者术后膀胱癌及癌旁组织16例,通过免疫组化方法对组织样本的STK32C蛋白的表达量进行评定。比较STK32C在患者癌组织及癌旁中表达的差异。3.选用人膀胱癌细胞株T24和5637细胞,慢病毒载体转染,构建STK32C稳定敲低的细胞系,空载体转染作为阴性对照。用q RT-PCR和western blot实验方法从基因转录及翻译水平分别检测STK32C的敲低效率。通过细胞MTT实验、平板克隆实验、划痕实验和Transwell实验等方法,分析STK32C的敲低对膀胱癌细胞增殖、集落形成、迁移及侵袭能力的影响。4.通过String蛋白相互作用在线数据库,寻找与STK32C蛋白可能存在相互关联的蛋白分子。使用western blot方法,检测敲低STK32C蛋白,对膀胱癌细胞m TOR信号通路关键性分子m TOR及p-m TOR蛋白表达量的影响。结果:1.从TCGA数据库414例膀胱癌分析发现,STK32C m RNA在414例膀胱癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。19例癌及癌旁组织配对病例中发现,STK32C m RNA在癌组织中仍然高表达(P<0.01)。12例肿瘤样本中STK32C m RNA相对于癌旁组织高表达,1例下降,6例无明显变化。2.免疫组化分析临床膀胱癌病例发现,相对于癌旁正常组织,STK32C蛋白在膀胱癌组织中明显高表达(P<0.01)。且有随着肿瘤病理分期恶化,STK32C表达量增高的趋势。3.通过构建膀胱癌T24及5637细胞STK32C稳定敲低及阴性转染对照组,对比两组细胞体外生物学功能。结果发现,与对照组相比,敲低STK32C,膀胱癌细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移能力及T24细胞侵袭能力都受到明显的抑制(P<0.05)。4.通过String蛋白相互作用在线预测工具,我们发现了10个与STK32C蛋白可能相关的蛋白分子。分析这些蛋白,我们发现m TOR与STK32C的关联性最大。利用western blot方法,我们发现敲低STK32C,m TOR及p-m TOR蛋白的表达量明显下降。结论:STK32C在膀胱癌中存在高表达,并可能与患者肿瘤的病理分期和分级相关。在体外,敲低STK32C,可显著抑制膀胱癌细胞的增殖、集落形成能、迁移及侵袭能力。同时,敲低STK32C蛋白,可降低m TOR及p-m TOR蛋白的表达。因此,我们认为STK32C通过影响m TOR蛋白的表达及磷酸化,调节m TOR通路的活性,从而参与膀胱癌细胞的生物学功能。这可能为临床膀胱癌患者的靶向治疗或标记物的研究提供了新思路。