多环芳烃菲降解菌的筛选、鉴定及其在土壤修复中的应用研究

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本论文将采自克拉玛依稠油污染的土壤样品,通过持续性的多环芳烃模式化合物菲选择压力富集驯化,获得菲的降解混合菌系。对筛选获得的1株能高效降解菲的细菌从生理生化,分子生物学角度进行较为系统的研究,探讨其降解特性,优化其降解菲的工艺条件。考察菌株在菲污染土壤中的实际应用,进一步研究多环芳烃降解基因,构建菌株基因组文库,寻找相关降解功能基因。主要研究内容和实验结果概述如下:(1)以菲为研究对象,从克拉玛依稠油污染土壤中筛选到1株对菲具有较好降解效果的菌株y-8。通过形态观察、生理生化指标及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为弯曲假单胞菌(Pseudomonas geniculata)。该菌最高耐受菲质量浓度可达3000mg/L。其电子传递呼吸链活性与细菌数量成正比。对多种芳香有机物的降解实验表明,该菌株可能是通过邻苯二酚途径降解菲。(2)从接种量、温度和pH等不同环境因子考察菌株对菲的降解。正交实验优化菲降解条件。通过响应面法分析,得出菲降解率最佳表面活性剂配方为:吐温-80浓度581mg/L,Triton X-100浓度185mg/L,SDS浓度22mg/L。在最佳优化条件下,菌株y-8对菲的降解率达到91.20%,与优化前的86.65%相比,菲降解率提高接近4.55%。(3)通过Monod模型,对菌株y-8降解土壤菲的条件进行单因素实验。结果表明:菌株y-8在菲浓度为10μg/kg,温度30~40℃,接种量40~50%,pH7.0~8.0,吐温-80浓度100~200mg/L的培养条件下15d对菲的降解率达到78.70%。以温度、接种量、pH这三个因素设计试验,试验数据求得模型参数,建立菌株y-8对污染土壤中菲降解的数学模型,得到菌株y-8生长动力学响应方程式。(4)对菌株降解菲的相关功能基因进行分析。提取菌株y-8的基因组DNA,Sau3A I酶切基因组DNA,切胶回收1~3kb基因片段,pUC-18为载体,导入大肠杆菌DH5,对菲降解菌株y-8的基因组文库进行构建。
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