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第一部分Glycitin对人胰腺癌细胞增殖和凋亡影响的研究目的研究Glycitin对人胰腺癌细胞增殖、凋亡等的影响。方法采用CCK-8检测细胞增殖活性;细胞克隆形成能力用Colony formation assay进行检测;细胞凋亡用Annexin V-FITC/PI双染色法进行检测;Western Blot检测凋亡相关蛋白（Cleaved PARP,Cleaved caspase3）的表达水平;采用caspase抑制剂（Z-VAD-FMK、Z-IETD-FMK和Z-LEHD-FMK）分别干预后检测Glycitin的促凋亡作用靶点。结果Glycitin适度抑制人胰腺癌细胞株（Panc-1,Mia PaCa-2）的生长,且随着药物浓度和作用时间的增加,抑制作用逐渐增强;Glycitin对细胞克隆形成有一定的抑制作用;Glycitin能诱导胰腺癌细胞凋亡;且Western Blot结果显示Cleaved PARP,Cleaved caspase3表达水平上调,提示Glycitin可诱导促进凋亡蛋白的表达;同时,Glycitin诱导的细胞凋亡依赖于激活caspase9相关的内源性凋亡途径。结论Glycitin在体外可抑制人胰腺癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡,且这种凋亡依赖于激活内源性凋亡途径。第二部分Glycitin对人胰腺癌细胞自噬影响的研究目的研究Glycitin对胰腺癌细胞自噬的影响。方法Glycitin单药或联合自噬阻滞剂氯喹（Chloroquine,CQ）作用人胰腺癌细胞后,Western Blot检测自噬相关蛋白（P62/SQSTM1,LC3-II）的表达水平;腺病毒携带的GFP-mRFP-LC3转染人胰腺癌细胞Panc-1后,用Glycitin处理,激光共聚焦显微镜观察细胞内的红、绿斑点及共聚焦后的黄色斑点。结果Western Blot结果显示Glycitin可诱导两种人胰腺癌细胞自噬相关蛋白LC3-II和P62/SQSTM1的积累,且随着药物浓度和作用时间的增加,其蛋白水平逐渐上升;但与氯喹联用后,Glycitin未能进一步提高两种细胞中LC3-II的表达水平。激光共聚焦实验结果显示,阳性对照组雷帕霉素（rapamycin）作用后细胞内主要出现红斑点聚集,而用CQ或Glycitin处理后细胞内出现黄色斑点形成。结论Glycitin抑制人胰腺癌细胞自噬,且这种抑制作用是通过抑制自噬晚期成熟过程而实现。第三部分吉西他滨对人胰腺癌细胞自噬影响的研究目的研究吉西他滨对人胰腺癌细胞自噬的影响及其作用。方法吉西他滨单药或联合氯喹作用人胰腺癌细胞（Panc-1,Mia Pa Ca-2）后,Western Blot检测自噬相关蛋白LC3和P62/SQSTM1蛋白水平的变化;吉西他滨+氯喹作用下人胰腺癌细胞凋亡用Annnexin V-FITC/PI双染色法检测;Western Blot检测凋亡相关蛋白（Cleaved PARP,Cleaved caspase3）的表达水平。采用si RNA沉默人胰腺癌细胞（Panc-1,Mia Pa Ca-2）自噬关键基因Atg5,再联合吉西他滨干预,检测细胞自噬水平及凋亡的变化。结果两种人胰腺癌细胞在吉西他滨作用下,自噬相关蛋白P62/SQSTM1表达减少,而LC3-II表达增多,且随着药物浓度及作用时间的增加而程度加强;与氯喹联用后,P62/SQSTM1表达水平增加,LC3-II表达水平升高更明显;且与吉西他滨单药相比较,与氯喹联用后细胞凋亡增加（p＜0.05）;同时,基因沉默Atg5后再用吉西他滨处理,LC3-II水平下降,P62/SQSTM1水平增加;同时,能显著增加吉西他滨诱导的细胞凋亡,并增加Cleaved PARP,Cleaved caspase3蛋白的表达水平。结论吉西他滨可诱导人胰腺癌细胞产生自噬,且这种自噬对胰腺癌细胞起保护作用。第四部分Glycitin联合吉西他滨对人胰腺癌细胞作用的研究目的研究Glycitin联合吉西他滨对人胰腺癌细胞的作用。方法采用不同浓度吉西他滨单药或联合固定浓度Glycitin作用两种人胰腺癌细胞。采用CCK-8检测细胞活性;细胞克隆形成能力用Colony formation assay进行检测;细胞凋亡用Annexin V-FITC/PI双染色法进行检测;Western Blot检测自噬相关蛋白（P62/SQSTM1,LC3-II）及凋亡相关蛋白（Cleaved PARP,Cleaved caspase3）的表达水平。腺病毒携带的GFP-mRFP-LC3转染人胰腺癌细胞Panc-1后,用DMSO、Glycitin、吉西他滨和吉西他滨+Glycitin分别处理,激光共聚焦显微镜观察细胞内的红、绿斑点及共聚焦后的黄色斑点。结果与单用吉西他滨比较,Glycitin联合吉西他滨对胰腺癌细胞的增殖抑制作用加强（p＜0.05）;且显著减少了细胞的集落形成能力;同时,Glycitin以类似于氯喹的方式增强了吉西他滨诱导的LC3-II积累并降低了P62/SQSTM1的清除率;激光共聚焦实验结果进一步明确Glycitin可抑制吉西他滨诱导的自噬,细胞内出现黄色斑点;与单用吉西他滨相比,吉西他滨联合Glycitin增强了对胰腺癌细胞的促凋亡作用（p＜0.05）,凋亡相关蛋白Cleaved PARP及Cleaved caspase3表达水平也显著增加。结论通过抑制吉西他滨诱导的保护性自噬,Glycitin增强吉西他滨对胰腺癌细胞的增殖抑制作用和促凋亡作用。