CP7菌抗菌物质对家蚕病原细菌抑杀作用机理的研究

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CP7菌是一株能高效分泌抗菌物质的多粘类芽孢杆菌(Panibacilluspolymyxa),由导师课题组分离纯化获得。该菌的抗菌蛋白对革兰氏阳性菌、阴性菌、丝状真菌等有广谱的抗菌活性,具有水溶性好、对热稳定等优点。本文选择了家蚕病原菌中的革兰氏阳性菌一黑胸败血菌和革兰氏阴性菌.铜绿假单胞菌为供试菌,研究了CP7菌抗菌物质粗提液对上述2种细菌的杀菌作用机理,并从蚕病发生的防治作用方面进行了初步的试验,结果如下: (DCP7菌抗菌物质粗提液对黑胸败血菌及其孢子、铜绿假单胞菌有很强的抑菌活性。对铜绿假单胞菌的MIC和MBC分别为2%、7%;对黑胸败血菌的MIC和MBC分别为7%、10%。对黑胸败血菌芽孢的MIC和MBC分别为20%、32%。抑菌效果大小是:铜绿假单胞菌>黑胸败血菌>黑胸败血菌孢子。 (2)通过扫描电镜和透射电镜观察,抗菌物质粗提液作用黑胸败血菌及其孢子、铜绿假单胞菌后,菌体发生变形、凹陷,继而菌体空瘪,细胞壁和细胞膜受到破坏,原生质体凝集,细胞内形成很多空白区域、部分细胞器溶解,胞内物质泄漏。推测抗菌物质粗提液作用菌体细胞后,在细胞上形成孔洞或形成离子通道,使内容物泄露。孢子经20%抗菌物质粗提液处理后,孢子不能萌发,外壳层发生变形,表面显著褶皱。 (3)CP7菌抗菌物质粗提液处理黑胸败血菌和铜绿假单胞菌后,引起了菌体内DNA和磷的泄漏。黑胸败血菌经抗菌物质粗提液作用20min时,检测上清液中磷含量达到237.3μg/mL,DNA的量为8.824#g/mL,;1h后达到最大值分别为298μg/mL、10.392μg/mL,而对照中磷的含量仅为36μg/mL,DNA为1.023μg/mL,~.几乎不变。铜绿假单胞菌经lOmin处理时,磷的含量达到82.9μg/mL,DNA的量为6.258μg/mL;1h时磷的含量达到188.4μg/mL,DNA达到10.365μg/mL,对照中磷的含量为32.5μg/mL,DNA为0.925μg/mL,基本保持不变。 (4)用CP7菌抗菌物质粗提液处理菌体后,黑胸败血菌在短时间内耗氧量急剧增加,其呼吸作用从起始到结束所持续的时间变短。4%粗提液处理黑胸败血菌,该菌体12min时呼吸作用结束,此时耗氧百分率为89%;30%粗提液处理菌体8min后呼吸作用停止,耗氧百分率为92%。对照组菌体则经过36min后呼吸作用才结束,其耗氧百分率为90%。4%粗提液处理铜绿假单胞菌,菌体在24min后呼吸作用结束,此时耗氧百分率为47.7%;30%粗提液处理菌体18min后呼吸作用结束,耗氧百分率为12.7%。对照组菌体在30min后呼吸作用结束,其耗氧百分率为95%。 (5)通过养蚕测试,黑胸败血菌和铜绿假单胞菌经抗菌物质粗提液处理后,对蚕的致病力明显降低。给蚕添食黑胸败血菌或铜绿假单胞菌后再添食CP7菌抗菌物质粗提液,发病率明显低于对照区,表明抗菌物质粗提液对胃肠病有明显的治疗作用。
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