【摘 要】
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膜蛋白是一类庞大的蛋白质家族,在生物体的生命活动中发挥着重要作用。膜蛋白不仅具有强烈的疏水性,而且需要定位到细胞膜上,导致其表达困难。迄今为止,由于很难获得正确的膜
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膜蛋白是一类庞大的蛋白质家族,在生物体的生命活动中发挥着重要作用。膜蛋白不仅具有强烈的疏水性,而且需要定位到细胞膜上,导致其表达困难。迄今为止,由于很难获得正确的膜蛋白,导致没有任何膜蛋白获得结构解析。无细胞蛋白质合成系统是一种能够在体外表达蛋白质的系统,其特点为表达体系具有开放性、不受活体细胞生命限制、高效和快速。针对膜蛋白的特殊性和表达需求,我们尝试用无细胞的方法进行膜蛋白的表达。本论文对无细胞表达体系的构成及温度、表达时间等实验条件进行了研究,成功建立了适合于膜蛋白表达的无细胞蛋白质合成平台。利用建立的表达平台,成功表达出果蝇嗅觉受体蛋白质Or83b、Or7a和Or42a,最高表达量达到313μg/ml,实现了嗅觉受体蛋白的高浓度大量表达,为膜蛋白的后续研究提供坚实基础。最后还探索了七种去污剂Brij35、Brij58、Triton100、Triton114、NP40、Tween20、Tween80对表达的影响,找到了对各蛋白可溶性表达最有效的去污剂,最高表达量达到148μg/ml。
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