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【目的】
早老素(progerin )的累积是儿童早老症(Hutchinson-Gilford Progeria Syndrome,HGPS)致病的关键因素，它能引起儿童早老症患者的细胞出现一系列失衡情况，加速细胞衰老，最终导致个体的早衰。肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占大多数。progerin是否能引起肿瘤细胞稳态失衡？是否能在抑制肿瘤方面发挥一定作用？这些问题值得进行深入研究。本研究将progerin导入A549细胞，探讨其对肿瘤细胞在增殖、迁移、侵袭、DNA损伤、衰老及凋亡等方面的影响及机制，可能揭示progerin抑制肿瘤方面的功能并为相关治疗提供新的思路。
【方法】
1.将构建好的慢病毒GV219感染A549细胞，建立过表达progerin的细胞株(A549-PG)和对照组细胞株(A549-GFP)。
2.利用DAPI染色实验观察两组细胞的细胞核形态是否发生变化。
3.采用克隆形成实验和EdU实验检测progerin是否影响A549细胞增殖。
4.用H2O2和顺铂分别处理A549-PG细胞及A549-GFP细胞，检测细胞DNA损伤修复能力。
5.通过Transwell小孔实验检测A549细胞的迁移以及侵袭能力是否受progerin影响。
6.通过β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色，观察高表达progerin的A549细胞的衰老情况。
7.利用Westernblot和荧光定量PCR检测CDK4、pRB、cyclinD1、γ-H2AX、ATM、ANLN、MMP7、MMP9、PARP1、p53和p21等相关基因的表达情况。
【结果】
1.成功构建过表达progerin的A549细胞株A549-PG。
2.DAPI染色结果显示progerin过表达的A549-PG细胞出现了(21.1±1.14)%异常核形态，对照组A549-GFP为(1.9±1.35)%。
3.progerin过表达导致A549细胞增殖能力下降了(36±1.26)%，细胞周期相关的蛋白CDK4和cyclinD1下调3~4倍。
4.400μmol/LH2O2或50μmol/L顺铂处理后的A549-PG细胞，DNA损伤标志物γ-H2AX升高2~4倍，相关的蛋白激酶ATM和DNA-PKcs也显著升高。
5.progerin高表达的A549细胞，细胞迁移能力下降了(75±1.03)%，其迁移相关蛋白ANLN下调3~5倍。
6.过表达progerin的A549细胞，侵袭能力下降了(63±1.05)%，与对照组相比在A549-PG细胞中，基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinases 7，MMP7)下调了(79±2.13)%，基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases 9，MMP9)下调了(64±2.51)%。
7.β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)实验未检测到A549-GFP和A549-PG有染色差别，Westernblot结果显示两组细胞中衰老相关蛋白p16、p21无变化。
【结论】
Progerin能引起A549细胞发生核畸形，并导致细胞增殖能力、DNA损伤修复能力、迁移和侵袭能力均明显下降。表明progerin会引起A549细胞内稳态失衡，肿瘤细胞特性被减弱，对DNA损伤诱导剂更加敏感，能为肿瘤治疗提供一定的参考。
早老素(progerin )的累积是儿童早老症(Hutchinson-Gilford Progeria Syndrome,HGPS)致病的关键因素，它能引起儿童早老症患者的细胞出现一系列失衡情况，加速细胞衰老，最终导致个体的早衰。肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占大多数。progerin是否能引起肿瘤细胞稳态失衡？是否能在抑制肿瘤方面发挥一定作用？这些问题值得进行深入研究。本研究将progerin导入A549细胞，探讨其对肿瘤细胞在增殖、迁移、侵袭、DNA损伤、衰老及凋亡等方面的影响及机制，可能揭示progerin抑制肿瘤方面的功能并为相关治疗提供新的思路。
【方法】
1.将构建好的慢病毒GV219感染A549细胞，建立过表达progerin的细胞株(A549-PG)和对照组细胞株(A549-GFP)。
2.利用DAPI染色实验观察两组细胞的细胞核形态是否发生变化。
3.采用克隆形成实验和EdU实验检测progerin是否影响A549细胞增殖。
4.用H2O2和顺铂分别处理A549-PG细胞及A549-GFP细胞，检测细胞DNA损伤修复能力。
5.通过Transwell小孔实验检测A549细胞的迁移以及侵袭能力是否受progerin影响。
6.通过β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色，观察高表达progerin的A549细胞的衰老情况。
7.利用Westernblot和荧光定量PCR检测CDK4、pRB、cyclinD1、γ-H2AX、ATM、ANLN、MMP7、MMP9、PARP1、p53和p21等相关基因的表达情况。
【结果】
1.成功构建过表达progerin的A549细胞株A549-PG。
2.DAPI染色结果显示progerin过表达的A549-PG细胞出现了(21.1±1.14)%异常核形态，对照组A549-GFP为(1.9±1.35)%。
3.progerin过表达导致A549细胞增殖能力下降了(36±1.26)%，细胞周期相关的蛋白CDK4和cyclinD1下调3~4倍。
4.400μmol/LH2O2或50μmol/L顺铂处理后的A549-PG细胞，DNA损伤标志物γ-H2AX升高2~4倍，相关的蛋白激酶ATM和DNA-PKcs也显著升高。
5.progerin高表达的A549细胞，细胞迁移能力下降了(75±1.03)%，其迁移相关蛋白ANLN下调3~5倍。
6.过表达progerin的A549细胞，侵袭能力下降了(63±1.05)%，与对照组相比在A549-PG细胞中，基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinases 7，MMP7)下调了(79±2.13)%，基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases 9，MMP9)下调了(64±2.51)%。
7.β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)实验未检测到A549-GFP和A549-PG有染色差别，Westernblot结果显示两组细胞中衰老相关蛋白p16、p21无变化。
【结论】
Progerin能引起A549细胞发生核畸形，并导致细胞增殖能力、DNA损伤修复能力、迁移和侵袭能力均明显下降。表明progerin会引起A549细胞内稳态失衡，肿瘤细胞特性被减弱，对DNA损伤诱导剂更加敏感，能为肿瘤治疗提供一定的参考。