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目的:检测公共消毒环境分离的葡萄球菌对季铵盐类化合物的抗药性、相关抗性基因的定位和耐药的转移及其影响因素,为有效控制细菌对消毒剂耐药性的发展提供一定科学研究基础,为消毒剂的合理使用提供新的科学依据。
方法:收集医院公共消毒环境中分离的葡萄球菌共26株,采用琼脂稀释测定MIC的方法对其耐药性和对消毒剂的适应性进行考察。应用PCR基因扩增试验检测葡萄球菌中耐季铵盐的qacA/B,smr,qacG,qacH和qacE△1基因水平。然后提取和消除耐药菌株的质粒,确定基因是否位于质粒上。最后进行耐药质粒在葡萄球菌和大肠埃希菌之间的接合转移实验,并考察不同供受体比例,交配时间下接合转移率的不同,以及亚抑菌浓度季铵盐作用和作用时间对接合转移率的影响。
结果:在调查的26株葡萄球菌中已经有15株对季铵盐产生了较高的抵抗力,最小抑菌浓度值高于48μg/ml。绝大多数葡萄球菌经过适应性的培养后,最小抑菌浓度都有不同程度的增长。其中S1的MIC值更是从141μg/ml上升到48μg/ml。但有10株增长后仍不超过26μg/ml。其余初始最小抑菌浓度值不低于48μg/ml的菌株除812培养后最小抑菌浓度仍为50μg/ml外,都高于70μg/ml。其中9株携带qacA/B基因,1株携带smr。qacG,qacH和qacE△1均未检出。提取质粒后的结果中,我们发现提取到质粒的九株葡萄球菌刚好是被检出含有qacA/B耐药基因的菌株,含有qacA/B耐药基因的菌株都携带有质粒。质粒消除后,葡萄球菌对季铵盐的耐药性大幅下降。质粒可以在葡萄球菌和大肠埃希菌细菌之间进行转移。质粒从葡萄球菌到大肠埃希菌的滤膜接合转移中,最佳的供受体比例为3:1,最佳的交配时间为32h,添加亚抑菌浓度的季铵盐可以大大提高转移率,且最佳的浓度为4μg/ml,而接合转移率随着亚抑菌浓度季铵盐作用时间的增加而增加。
结论:医院消毒环境中葡萄球菌对季铵盐的耐药率高,携带了qacA/B耐药基因的菌株,均表现出对季铵盐的抵抗性。qacA/B耐药基因位于质粒上,可以在不同种属的细菌之间进行传播,且亚抑菌浓度季铵盐可以促进它的传播。我们应加强环境中微生物对消毒剂的耐药监测,合理使用消毒剂。