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目的:
缺血性脑卒中是严重危害人民健康的主要疾病,其直接降低了患者的生存质量,给家庭和社会带来了沉重的负担。临床研究表明,运动训练可以显著改善缺血性脑卒中所引起的功能障碍,提高患者的生存质量。藏医理论认为人体存在白脉和黑脉两套系统,所谓黑脉系泛指动脉、静脉以及整个血液循环系统;而所谓白脉则包括大脑、小脑、延脑、脊髓以及各种神经。“白脉软膏”由著名藏医药学家贡曼贡确班达根据传统藏医药学理论,秉承经典巨著《四部医典》以及诸多藏医药学秘籍专著之精髓研制。经过几百年的临床应用和观察,发现本品对脑卒中等原因引起的神经系统疾病有着显著的疗效,可以促进脑梗塞患者运动功能的恢复。
本研究通过建立大鼠局灶性脑缺血模型,观察运动训练、应用传统藏药白脉软膏及二者联合应用后大鼠神经功能恢复情况,并通过免疫组织化学染色方法测定脑组织中生长相关蛋白-43(growth associated protein-43, GAP-43)和p38丝裂素活化蛋白激酶(p38mitogen activated protein kinase,p38MAPK)的表达变化,初步探讨运动训练、白脉软膏及二者联合应用对脑缺血模型大鼠行为功能的作用及其可能机制。
材料和方法:
1、大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型的制作:选取雄性Wistar大鼠136只,个体重量150g~250 g,采用Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞脑缺血模型,依照Longa等的方法对大鼠进行神经行为学评分,使用6分法评价大鼠脑缺血后运动及行为学缺陷,将评分为1—4分的大鼠纳入研究。
2、实验动物分组:将手术后符合入选标准的大鼠依次编号,随机分为模型组,运动训练干预组(简称运动组),白脉软膏药物干预组(简称白脉组),运动训练及白脉软膏联合干预组(简称联合治疗组),各组又分为术后1、3、7、14d四个时间点,每组每个时间点各8只大鼠,另设正常对照组8只。
3、运动训练效果的评定:分别在术后1、3、7、14d,采用Longa神经行为学评分评价神经功能的恢复情况。
4、大鼠脑内GAP-43和p38MAPK的鉴定:
①GAP-43阳性细胞变化情况:采用免疫组织化学染色了解各组大鼠脑内各时间点GAP-43阳性细胞增殖情况;
②p38MAPK阳性细胞变化情况:采用免疫组织化学染色了解各组大鼠脑内各时间点p38MAPK阳性细胞增殖情况;
结果:
1、神经行为学评分:造模成功后1d及3d各组动物神经功能评分无显著性差异,治疗7d和14d时白脉组和运动组以及联合治疗组神经功能评分高于模型组,有显著性差异(P<0.01),白脉组和运动组神经功能评分在各时间点均无显著性差异,联合治疗组在14d与白脉组及运动组相比神经功能评分高,有显著性差异(P<0.01)。
2、GAP-43阳性细胞增殖情况:免疫组化染色显示模型组梗死周边区GAP-43的阳性细胞数于缺血后1d即轻度升高,第7d达到高峰,此后逐渐降低。与模型组相比,运动组、白脉组及联合治疗组在7d和14d时脑缺血周边区GAP-43阳性细胞数增高,差异有显著性(P<0.01)。运动组与白脉组相比GAP-43阳性细胞数无显著性差异,联合治疗组大鼠脑GAP-43阳性细胞数增多,7d和14d时与运动组及白脉组相比有显著性差异(P<0.01)。
3、p38MAPK阳性细胞增殖情况:免疫组化染色显示模型组大鼠脑内梗死周边区p38MAPK的阳性细胞数于缺血损伤后1d达高峰,随后逐渐下降。阳性细胞主要见于缺血半球大脑皮层和梗死灶周边区。模型组p38MAPK在各时间点阳性细胞数均明显增多,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);运动组、白脉组及联合治疗组p38MAPK阳性细胞与模型组有相似表达规律,与模型组相比明显降低,在7、14d时有显著性差异(P<0.01),联合治疗组大鼠脑p38MAPK阳性细胞数比运动组及白脉组少,在7、14d时有显著性差异(P<0.05)。
结论:
运动训练、白脉软膏对局灶脑梗死大鼠神经功能恢复均有明显促进作用,可促进大鼠脑梗死后缺血周边区GAP-43的表达,抑制了大鼠脑内p38MAPK的持续表达。促进神经细胞再生,抑制神经细胞凋亡进程可能是运动训练及白脉软膏改善脑梗死大鼠运动功能的机制。运动训练和白脉软膏二组间治疗效果无显著差异,但二者联合应用具有更为明显的效果。