利用整体胚胎原位杂交技术研究斑马鱼Pygo1和Nulp1调控心脏发育的相关机制

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心脏发育是一个极其复杂的过程,受到一系列心脏发育基因的精确调控。这些基因的突变或异常表达将对心脏细胞的分化、心脏细胞的多样性以及心脏细胞的形态发生产生影响,但其具体分子机制仍有待阐明。经典的W.nt信号途径(即Wnt-β-catenin信号途径)在生物体的胚胎发育和一些疾病发生的过程中发挥了十分重要的作用。Pygo1基因是本实验室克隆的心脏发育候选基因,是Wnt信号途径的新成员,为β-catenin的辅助激活因子。本文以斑马鱼为模型,利用斑马鱼整体胚胎原位杂交技术,用心脏发育特异性标志基因Amhc、 Vmhc/Myl7、Nppa、Bmp4和Hand2的anti-sense RNA作为探针,在mRNA水平检测pygo1基因在斑马鱼不同发育时期对心脏发育的影响。结果显示,在斑马鱼发育的早期和晚期,pygo1基因能够通过调控Amhc、Vmhc、Myl7、Nppa、Bmp4和Hand2的表达水平来影响斑马鱼的心脏发育。Nulp1也是本研究室克隆鉴定的另一个心脏发育候选基因,本文利用斑马鱼为模型,研究nulp1基因在斑马鱼心脏发育早期中的作用。利用Morpholinos技术沉默两种转基因斑马鱼品系Tg(nppa::EGFP)和Tg(cmlc2::dsRed2)中nulp1基因的表达水平来分析该基因在脊椎动物心脏发育中的作用。结果表明沉默nulp1基因的功能后,与对照比较,心脏不能正常环化,心室变小、心房变大等突变表型,初步表明nulp1基因能够影响斑马鱼心脏发育。相关斑马鱼心脏生理学的分析结果,也证实了nulp1基因对斑马鱼心脏发育的影响。采用斑马鱼整体胚胎原位杂交技术检测nulpl基因对斑马鱼心脏发育早期和晚期的影响,原位杂交结果表明,无论在胚胎发育早期还是晚期,在沉默nulpl基因的表达后,斑马鱼心脏都呈现出心房变大、心室变小的结果,与前面的结果完全一致,表明nulpl基因能够通过分别影响斑马鱼心脏的心室和心房的形态来进一步调控斑马鱼心脏早期和晚期的发育。
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