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本研究探讨不同化学激活方法,死、活精子和不同部位精子及精子的预处理对牛ICSI结果的影响,以期优化牛ICSI的操作技术和体外培养条件。将冷冻/解冻牛精子或睾丸精子、附睾(头、体和尾)的精子注入体外成熟24h的牛卵母细胞中,经体外培养,观察其发育情况。研究结果如下:试验一,比较不同的激活方法A23187+(CHX+CD)+CHX、A23187+6-DMAP和Ionomycin+6-DMAP对牛ICSI卵的激活效果。A23187+(CHX+CD)+CHX组与A23187+6-DMAP组的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率差异不显著(60.6%和58.2%,15.1%和14.5%,4.5%和3.6%,P>0.05),Ionomycin+6-DMAP组的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率(79.3%,31.0%和14.5%)显著高于其它两组(P<0.05)。试验二,比较牛死精子和活精子对ICSI卵发育效果。两组之间的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率均无显著性差异(75.0%和79.4%、27.9%和30.9%、13.2%和16.2%,P>0.05)。试验三,比较牛不同部位精子ICSI卵发育效果。睾丸或附睾(头、体和尾)的精子ICSI后,四组之间的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率差异不显著(79.1%,79.5%,73.2%,75.0%;23.3%,20.5%,19.5%,18.2%和14.0%,13.4%,12.2%,9.1%,P>0.05)。试验四,研究了DTT预处理精子对ICSI卵的发育效果。(1)用DTT预处理精子1h,3h和5h,随着处理时间的延长,3h和5h组的精子核发生解聚的比率显著高于1h组(43.2%,49.8%和0.0%,P<0.05)。(2)用DTT预处理精子1h后用于ICSI,对照组相比,用DTT预处理精子组的解聚率和雄原核形成率显著高于对照组(30.4%和11.6%,47.8%和27.9%,P<0.05),但对卵裂率无显著差异(85.0%和80.0%,P>0.05),囊胚率和囊胚孵化率亦显著提高(45.8%和26.0%,31.3%和14.0%,P<0.05)。以上结果表明:(1)牛的ICSI用5μM/LIonomycin和2mM/L6-DMAP联合激活培养3h能够提高注射卵母细胞的发育率;(2)死精子亦可以用于牛ICSI;(3)从睾丸到附睾尾获取的精子,尽管处于不同的成熟阶段,但是对ICSI的注射卵母细胞发育均不产生显著影响;(4) DTT可以促进精子解聚,用5mM/L DTT预处理牛精子1h能促进原核形成和胚胎发育。