蕨菜总黄酮抗宫颈癌作用及机理研究

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宫颈癌是一种严重危害妇女健康和生命的生殖系统恶性肿瘤,病因目前尚未完全明了,可能是多种因素综合作用的作用。由于宫颈癌的发病原因和发病机理多种多样,防治很难一蹴而就,在治疗(如化疗)过程中容易产生毒副作用和多药耐药性,因而抗宫颈癌药物尤其是植物性抗宫颈癌药物的筛选成为肿瘤药理学和毒理学研究者的重要任务。从多角度系统地研究蕨菜黄酮抗宫颈癌效果,目前尚未见报道。本研究利用小鼠U14宫颈癌细胞和人宫颈癌Hela细胞建立体内和体外实验模型,对蕨菜黄酮抗宫颈癌效果进行了深入研究。蕨菜是药食两用植物,经常食用蕨菜具有保健作用。作为药用,蕨菜具有清热滑肠、降气化痰、利水安神、降压等功效。但有关蕨菜黄酮类物质是否具有抗肿瘤作用并未见相关报道,因此本文主要通过实验来研究蕨菜总黄酮对小鼠体内U14肿瘤细胞和体外人Hela细胞的抑制率及对机体免疫功能的影响。本实验通过醇提法提取蕨菜总黄酮,后经过溶剂萃取获得蕨菜精黄酮,研究其对小鼠移植性宫颈癌的影响。结果表明,蕨菜黄酮能明显抑制实体瘤小鼠肿瘤生长,低、中、高抑制率可达38.79%、44.54%、54.02%,延长腹水瘤小鼠的存活时间,生命延长率可达49.39%、62.20%、73.00%,具有显著的抗小鼠移植性宫颈癌生长的作用,对体外培养的Hela细胞具有很强的细胞毒性作用,抑制率可达89.3%。对肿瘤小鼠免疫器官胸腺和脾脏指数进行分析,结果发现蕨菜各剂量组均能提高小鼠胸腺指数和脾脏指数,表明其能促进免疫器官的生长。病理切片发现,蕨菜黄酮给药组小鼠肝、肾外观色泽质地均正常,肝、肾细胞排列紧凑、整齐,无病理学变化;表明各剂量组对小鼠肝、肾没有形成明显的毒性作用。蕨菜黄酮处理在体内可显著提高肿瘤小鼠血清的T-SOD和T-AOC水平,降低MDA水平,对肿瘤小鼠胸腺、脾脏组织进行测定显示T-AOC、T-SOD和GR水平均有所提高。免疫组化试验表明,蕨菜黄酮可显著抑制Bcl-2、突变型p53基因表达,上调Bax的表达。蕨菜总黄酮诱导的Hela肿瘤细胞进行流式细胞仪检测,细胞绝大部分均被抑制在G1期,S期和G2/M期细胞显著减少,抑制细胞增殖,导致肿瘤细胞凋亡。通过Hoechst染色法,可观察到凋亡小体,DNA片段化琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯形条带,这些都揭示了蕨菜黄酮对肿瘤细胞抑制的作用机制。本论文以U-14实体瘤、腹水瘤小鼠和Hela细胞为实验材料,通过体内外实验,初步揭示了蕨菜总黄酮抑制肿瘤细胞生长、提高机体免疫能力的作用机理,这些研究为蕨菜总黄酮作为天然抗肿瘤药物的进一步开发提供了理论依据。
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