【摘 要】
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研究目的:通过RNAseq发现Fosb基因在生发中心B细胞相比较于初始B细胞有着高表达现象,但功能作用尚不清楚。为了进一步探究该基因对淋巴细胞的具体作用机制,本课题计划通过Fosb基因敲除小鼠模型对T、B淋巴细胞的发育及HSC（Hematopoietic stem cells）的分化情况进行初步分析,并通过免疫刺激观察生发中心（germinal center,GC）B细胞以及抗体的形成情况,为更深
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研究目的:通过RNAseq发现Fosb基因在生发中心B细胞相比较于初始B细胞有着高表达现象,但功能作用尚不清楚。为了进一步探究该基因对淋巴细胞的具体作用机制,本课题计划通过Fosb基因敲除小鼠模型对T、B淋巴细胞的发育及HSC（Hematopoietic stem cells）的分化情况进行初步分析,并通过免疫刺激观察生发中心（germinal center,GC）B细胞以及抗体的形成情况,为更深入探究相关功能和机制提供可靠的理论依据。研究方法:流式细胞术（Flow Cyto Metry,FCM）,是现代生物学和医学常用技术,可以对悬浮在流体中的微小颗粒进行分析与分选。其可以用来对通过光学原件或电子检测器的每一个细胞进行连续的多种参数分析。流式细胞术是对流体悬液中的单个细胞或者是其他的生物粒子,通过检测我们标记的荧光信号,来实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。本研究通过CRISPR/Cas9基因编辑技术与显微注射技术的结合,将sg RNA和Cas9蛋白注射到小鼠胚胎中进而获得Fosb基因敲除小鼠。并运用流式细胞术对Fosb+/+和Fosb-/-小鼠进行检测分析各免疫器官和腹水中T、B淋巴细胞及其亚群的变化情况,以及造血干细胞中的分化情况。并通过对Fosb+/+和Fosb-/-小鼠注射NP20-CGG和绵羊红细胞来进行免疫刺激,以探究其生发中心的和抗体的形成情况的变化。研究结果:Fosb基因敲除小鼠经基因编辑发生了移码突变并能稳定遗传,且经DNA水平、mRNA水平、蛋白水平鉴定Fosb基因已完全敲除;经流式细胞术分析Fosb-/-与Fosb+/+小鼠相比T、B淋巴细胞及其亚群细胞和骨髓中造血干细胞的分化情况经统计学分析均无显著性差异性;Fosb-/-与Fosb+/+经胸腺依赖性抗原NP20-CGG免疫刺激B细胞形成生发中心和抗原特异性抗体的水平经统计学分析无显著性差异。结论:从DNA、mRNA、以及蛋白水平验证Fosb基因敲除成功。与野生型相比较,Fosb基因敲除小鼠中T、B淋巴细胞及骨髓造血干细胞的分化情况均无明显差异,且B细胞生发中心的形成与抗原特异性抗体的产生经统计学分析均无显著性差异。
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