野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞作用的影响及机制初步探讨

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目的:1.观察野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞增殖、细胞形态的影响。观察野黄芩苷和吉西他滨联合处理是否有协同抑制人胰腺癌PANC-1细胞增殖的作用。2.观察野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞细胞活力、凋亡率的影响。观察野黄芩苷和吉西他滨联合处理是否有协同促进人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的作用。3.初步探究野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞作用的可能机制,观察相关基因表达的变化情况。方法:1.CCK-8法检测在一定浓度和时间范围内野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理在体外对人胰腺癌PANC-1细胞抑制率的影响。2.倒置显微镜观察野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞形态的影响。3.台盼蓝染色法检测野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞活力的影响。4.PI双染流式细胞术检测野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞凋亡率的影响。5.QPCR法检测野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞中P53,Bcl-2,Bax相关基因表达情况的影响。结果:1.在一定浓度和时间范围内野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理在体外对人胰腺癌PANC-1细胞抑制率的影响(1)不同浓度野黄芩苷(200.00、240.00、280.00、320.00μg.mL-1)作用于人胰腺癌PANC-1细胞24、48、72 h后,细胞抑制率呈现明显的时间依赖性和浓度依赖性。浓度越高,细胞抑制率越低,时间越长,细胞抑制率越高。(2)不同浓度吉西他滨(81.38、162.76、244.14、325.52 nmol.L-1)作用于人胰腺癌PANC-1细胞24、48、72 h后,细胞抑制率与浓度无明显相关性,81.38nmol.L-1这一浓度细胞抑制率最高。但细胞抑制率与时间有一定的相关性,时间越长,细胞抑制率越高。(3)野黄芩苷(200.00μg.mL-1)及吉西他滨(81.38 nmol.L-1)单药和联合处理作用于人胰腺癌PANC-1细胞72 h后,野黄芩苷组、吉西他滨组、两药联合处理组三组抑制率均上升,且联合处理后细胞抑制率比单药治疗组上升更明显,说明野黄芩苷和吉西他滨联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞有协同抑制增殖作用。2.野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理组对人胰腺癌PANC-1细胞形态的影响用4种不同方式培养人胰腺癌PANC-1细胞24 h后,通过倒置显微镜观察到:正常人胰腺癌PANC-1细胞呈贴壁生长,为上皮样多角形,细胞大小均匀,细胞膜完整,胞核清楚可见。经野黄芩苷和吉西他滨处理后的人胰腺癌PANC-1细胞出现形态改变:细胞变大变圆,细胞膜不完整,细胞间隙变大,严重时细胞出现脱壁现象。野黄芩苷和吉西他滨联合处理时上述现象更明显。说明野黄芩苷和吉西他滨联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞有协同促进凋亡作用。3.野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理组对人胰腺癌PANC-1细胞活力的影响用4种不同方式培养人胰腺癌PANC-1细胞24 h后,相比阴性对照组,野黄芩苷组(200.00μg.mL-1)、吉西他滨组(81.38 nmol.L-1)、两药联合处理组三组存活率均下降,且两药联合处理组的细胞存活率比各单药处理组下降更明显,说明野黄芩苷和吉西他滨联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞有协同抑制增殖的作用。4.野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理组对人胰腺癌PANC-1细胞凋亡率的影响用4种不同方式培养人胰腺癌PANC-1细胞24 h后,相比阴性对照组,野黄芩苷组(200.00μg.mL-1)、吉西他滨组(81.38 nmol.L-1)、两药联合处理组三组凋亡率均增加,且联合处理组的细胞凋亡率比单药处理组升高更明显,说明野黄芩苷和吉西他滨联合处理对人胰腺癌PANC-1细胞有协同促进凋亡的作用。5.野黄芩苷和吉西他滨单药及联合处理组对人胰腺癌PANC-1细胞中P53,Bcl-2,Bax相关基因表达情况的影响(1)用4种不同方式培养人胰腺癌PANC-1细胞24 h后,P53基因的相对表达量在野黄芩苷和吉西他滨各单药组及联合处理组之间无明显差别。(2)用4种不同方式培养人胰腺癌PANC-1细胞24 h后,与阴性对照组相比,野黄芩苷组(200.00μg.mL-1)、吉西他滨组(81.38 nmol.L-1)、两药联合处理组三组的Bcl-2基因的相对表达量均降低。与阴性对照组相比,差异有统计学意义。(3)用4种不同方式培养人胰腺癌PANC-1细胞24 h后,与阴性对照组相比,野黄芩苷组(200.00μg.mL-1)、吉西他滨组(81.38 nmol.L-1)、两药联合处理组三组的Bax基因的相对表达量均升高。与阴性对照组相比,差异有统计学意义。结论:1.野黄芩苷和吉西他滨单药处理时对人胰腺癌PANC-1细胞有抑制增殖作用,且两药联合处理时细胞增殖抑制作用更明显。2.野黄芩苷和吉西他滨单药处理时对人胰腺癌PANC-1细胞有促进凋亡作用,且两药联合处理时细胞凋亡促进作用更明显。3.野黄芩苷抗胰腺癌作用可能通过上调Bax基因相对表达量,下调Bcl-2基因相对表达量来诱导细胞凋亡完成。
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