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目的:微循环功能障碍被证明与NEC的发病过程密切相关,与此同时,人们研究认为H2S具有扩张血管、抗炎、抗凋亡、促进血管内皮细胞新生的作用。而,PPARβ/8-eNOS/NO激活也被证明在高血糖模型中具有保护作用,本研究的目的旨在于探讨H2S在新生儿坏死性小肠结肠炎大鼠的肠道微循环中的保护作用,以及其与PPARβ/8-eNOS/NO通路的关系。方法:1.用新生SPF级SD大鼠通过配方奶喂养、缺氧、冷刺激、脂多糖(LPS)腹腔注射处理3天建立新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)模型。取模型组以及正常对照组大鼠末端回肠,用蛋白免疫印迹和免疫组化(IHC)方法检测三种硫化氢合成酶胱硫醚β-合成酶(cystathionine beta synthase:CBS)、胱硫醚γ裂合酶(Cystathionine gamma lyase:CSE)、3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase:3-MST)的表达。2.根据以上结果用蛋白免疫印迹和免疫组化(IHC)方法检测出生3天SPF级SD大鼠消化道(食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠)CBS合酶表达含量差异。3.120只新生SD大鼠被随机分成6组,正常组,NEC组,GYY4137组(7.5 mg/kg.d,15 mg/kg.d,30 mg/kg.d),AOAA(CBS 合酶抑制剂)组。探究 H2S 对NEC肠道微循环的保护作用,并确定其最有效保护浓度以及有毒剂量。HE染色,组织损伤学评分,实体图被用于显示肠组织损伤程度,蛋白免疫印迹技术以及免疫组化技术测定CBS表达含量,激光散斑血流实时成像系统检测血流量值,分析各组新生大鼠生存时间变化。4.100只新生SD大鼠被随机分成5组,正常组,NEC组,GYY4137组(7.5 mg/kg.d,外源性硫化氢供体),GSK0660(PPARβ/δ抑制剂)组。探究H2S对肠道微循环的保护作用是否与PPARβ/ε-eNOS/NO信号通路有关。HE染色,组织损伤学评分,实体图被用于显示肠组织损伤程度,CBS、过氧化物酶体增殖物激活受 β/δ(peroxisome proliferator-activated receptor β/8:PPARβ/δ)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase:eNOS)的表达通过蛋白免疫印迹技术以及IHC方法进行测定。激光散斑血流实时成像系统检测血流量值,生存分析方法分析各组新生大鼠生存时间变化。结果:1.CBS合酶为新生大鼠以及NEC大鼠末端回肠唯一表达的H2S合酶。CBS表达含量,模型组比正常组降低。2.新生3天SD大鼠回肠、结肠组织CBS合酶表达含量皆较高,说明内源性H2S含量与NEC好发部位之间可能具有一定关系。3.与正常对照组相比,NEC组大鼠肠道微循环血流量显著下降,而组织学评分和死亡率显著性提高。NEC大鼠给予7.5 mg/kg.d GYY4137时,能够逆转以上所有变化。当NEC大鼠给予15 mg/kg.d GYY4137时,肠道微循环血流量进一步提高,与此同时组织学评分以及死亡率并无显著性差别。NEC模型鼠给30 mg/kg.d GYY4137时,其死亡率在明显提高,且可见明显的肠组织淤血坏死。AOAA显著抑制 H2S 表达并使NEC 恶化。GYY4137 从 7.5 mg/kg.d 至 30 mg/kg.d呈现剂量依赖性抑制CBS的表达。模型组CBS表达含量比正常组降低。各组末端回肠与全腹部血流量值无显著性差异。4.GYY4137组给予GSK0660时,其死亡率较GYY4137组减低,NEC评分显著性降低,血流量值无显著差异。与正常对照组相比,模型组CBS和eNOS的表达显著性降低,PPARβ/δ表达显著性提高。GYY4137和AOAA抑制CBS和eNOS表达,但是,两者皆诱导PPARβ/δ表达。GSK0660提高CBS和eNOS的表达。结论:H2S(7.5mg/kg.d)能够保护新生NEC大鼠肠道微循环,当其浓度升高时,毒副作用也逐渐升高,30mg/kg.d时,具有明显的毒副作用。而PPARβ/δ抑制剂GSK0660能够上调eNOS/NO通路促进H2S的保护作用,但其机制与改变微循环无关。