葡萄酒渣中白藜芦醇的提取、纯化及体外生物活性研究

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本实验以生产酿造葡萄酒的副产物——葡萄酒渣为原料,就葡萄酒渣中具有多种生物学功能的物质白藜芦醇,对其提取、纯化及体外活性进行了较为系统的研究,旨在考察葡萄酒渣开发利用的科学合理性。主要研究结果如下:(1)采用纤维素酶法辅助提取葡萄酒渣中白藜芦醇,在单因素实验的基础上,利用四因素三水平的Box-Behnken试验设计方案,研究了酶添加量、酶解时间、酶解温度、酶解pH值对提取葡萄酒渣中白藜芦醇的影响,通过Design-Expert 7.0软件建立回归方程模型并进行响应面分析,确定酶法提取的最佳条件为:酶添加量5 U/g底物,酶解时间102.96 min,酶解温度52.34℃,酶解pH值4.79,在此条件下,白藜芦醇提取量达516.53μg/g,通过与原料未经酶解处理的直接醇提取法相比,可以得出酶法提取明显优于直接醇提法的结论。(2)采用大孔树脂法对白藜芦醇进行了纯化研究,选用NKA-9型大孔树脂来分离纯化白藜芦醇:在上样pH为4、上样速度为1 mL/min时,吸附最佳,100 min左右基本完成对白藜芦醇的吸附;对吸附后的NKA-9型大孔树脂采用75%的乙醇溶液洗脱,以洗脱流速1 mL/min进行解吸,大约消耗200 mL的解吸剂能把白藜芦醇解吸下来。该工艺生产的白藜芦醇纯度达到26.03%。(3)采用酶促动力学方法对白藜芦醇体外抑制酪氨酸酶单酚酶、二酚酶活性进行了研究,结果表明:白藜芦醇对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶均有抑制作用,对抑制单酚酶、二酚酶活性的IC50值分别约为5.1 mg/mL和5.6mg/mL。对酪氨酸酶二酚酶的抑制作用表现为混合型抑制,对游离酶的抑制常数(KI)为3.35 mg/mL,对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)为35.98 mg/mL。(4)对白藜芦醇体外抑制血小板聚集作用进行初步分析,结果表明白藜芦醇在体外对ADP诱导的血小板聚集具有一定的抑制作用,且抑制能力依赖于白藜芦醇的浓度。在本实验中所用的浓度范围内(0.0125 mg/mL~0.10 mg/mL),浓度越大,抑制作用越强,IC50值约为0.046 mg/mL。
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