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本研究以大鼠乳腺癌细胞系（SHZ-88）为研究对象，观察了2种大豆异黄酮（大豆黄酮、染料木素）对其体外增殖的影响，并从DNA合成、细胞周期与凋亡以及cAMP／PKA信号通路等方面分析了二者抑癌的作用机理。同时，建立了大鼠小肠上皮细胞的培养体系，初步探讨了这2种大豆异黄酮对小肠上皮细胞体外生长的影响。 1 大豆异黄酮对大鼠乳腺癌细胞（SHZ-88）体外增殖的影响 应用3H-TdR掺入法和MTT法，研究了大豆黄酮、染料木素和雌激素对SHZ-88细胞体外增殖的影响。结果表明：在低浓度时（≤100ng／ml），大豆黄酮和染料木素对癌细胞的增殖没有明显的影响，而雌激素则表现出一定的促增殖效应（与0ng／ml对照组比较，1ng／ml雌激素、P=0.066，10ng／ml雌激素、P=0.026，100ng／ml雌激素、P=0.054）；同时，各浓度的大豆异黄酮不影响10ng／ml雌激素的促生长作用，但在高浓度时，大豆黄酮（≥10μg／ml）和染料木素（≥5μg／ml）均显著抑制癌细胞的增殖，并存在明显的剂量和时间依赖性；其中大豆黄酮和染料木素的半数抑制浓度(IC50)分别为53.74±0.83μg／ml和13.09±0.15μg／ml，说明染料木素对癌细胞的抑制作用强于大豆黄酮；同时，50μg／ml大豆黄酮和15μg／ml染料木素还能降低100ng／ml表皮生长因子对癌细胞的促生长作用，但未能完全抑制。 2 大豆异黄酮对大鼠乳腺癌细胞（SHZ-88）细胞学与生化学特性的影响 在体外培养的条件下，观察了大豆异黄酮对SHZ-88细胞部分细胞学及生化学特性的影响。结果显示：50μg／ml大豆黄酮和15μg／ml染料木素均能够影响癌细胞的生长曲线，延长指数生长期内癌细胞的群体倍增时间（对照组18.3±1.0h，大豆黄酮组21.9±0.7h，染料木素组33.9±1.0h，P＜0.01），降低癌细胞分裂指数和单细胞克隆形成率（对照组74.2±3.0％，大豆黄酮组47.4±6.5％，染料木素组33.1±8.0％，P＜0.01）；同时还降低了癌细胞内乳酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶和碱性磷酸酶的活性（与对照组比较，P＜0.01），但提高了胞内总蛋白的含量（对照组0.32±0.06mg／l×106个细胞，大林成招大豆异黄酮植物雌激紊时大鼠乳腺疮细胞和小肠上皮细胞生长的影响及其机理研究豆黄酮组0.65土0.15 mg/1洲106个细胞，染料木素组0.65土0.04 mg/一106个细胞，尸<a口了）;而在短时间内（24h），对癌细胞的内部超微结构未产生明显的影响.这提示大豆异黄酮在抑制癌细胞增殖的同时可能诱导了细胞分化，通过某些途径恢复了细胞功能，增强了细胞蛋白合成的能力.3大豆异黄酮抑制大氛乳旅病细她（SH各88）增殖的机理研究 主要应用同位素掺入法、流式细胞术、放射免疫测定法和R不PCR等方法，分析了细胞DNA合成、周期变化以及凋亡情况，并检测了细胞环腺普酸（c AMP）的浓度、腺普酸环化酶（Ac）、磷酸二醋酶（P DE）和cAMP依赖性蛋白激酶伊KA)的活性以及cAMP反应元件结合蛋白（CREB）mRNA表达的变化，研究大豆黄酮和染料木素抑制乳腺癌细胞增殖的可能作用机理.结果表明:50“留ml大豆黄酮和15。岁ml染料木素均能降低癌细胞3H一TdR的掺入量，抑制其DNA的合成;增加s期细胞的比例，阻滞细胞的周期活动;但未引起明显的细胞凋亡.与对照组相比，在大豆黄酮和染料木素处理后，smin胞内cAMP的含量显著提高附照组1 .042土0.037Pm。漪匕，大豆黄酮组l一4一士o.o72pmol琦L，染料木素组x .157士o.os4pmoU孔，尸<a盯)，一omin差异达极显著（对照组1 .037土0.056卿oU孔，大豆黄酮组1 .355土0.o65pmoU孔，染料木素组1 .455士o.070pmoU孔，P<0.01），20min后开始回降:在试验处理时间内AC的活性不受影响;PDE的活性在smin时被显著抑制（对照组23.742土4.483U/mg，大豆黄酮组1 7.035土2.726U/mg，染料木素组一7.002士4.55oU/mg，尸<ao万），lomin后逐渐回升:PKA的活性在20min时显著升高（对照组0.341土0.045 pmol·min-l·陀一，大豆黄酮组0.429士0.03 lpmol·min一’·林g一，，染料木素组0.417士0.061 pmol·min‘，·林g‘，，尸<a盯），4omin仍维持高水平（对照组0.333土0.脸3 pmol·min一，·仁g‘，，大豆黄酮组0.437土0.080pmo一min.’·林g”，染料木素组0.422土0.053 pmol·min”·林g-’，尸<0.0万）:e既Bm洲A的表达量在3一6h内显著提高（3h时照组0.930士0.097，大豆黄酮组1 .224土0.063，染料木素组1 .405士0.342:6h对照组0.961土0.184，大豆黄酮组1.307士0.087，染料木素组1 .303土0.213，尸<a仍），12h后恢复到对照水平.这些结果说明大豆异黄酮类物质能够抑制大鼠乳腺癌细胞DNA的合成能力;阻滞癌细胞的周期进展;激活胞内cAMP用KA信号通路，且PDE活性的抑制起了主导作用.由此提示激活cAMP/P KA信号通路可能是大豆异黄酮抗癌的作用机制之一4大豆异黄酮对大裁小肠上皮细胞生长的影响 应用酶消化法分离培养了大鼠小肠上皮细胞.来源于成年大鼠的小肠上皮细胞难以成活;而来源于其乳鼠（出生7天内）的小肠上皮细胞于24h内贴壁铺展，第一周中文摘要内生长缓慢，6一7天后生长加快，10一12天细胞长满70%左右.细胞角蛋白免疫组化鉴定结果表明所获得的细胞主要为上皮成分.应用3H一TdR掺入法检测了大?