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目的:观察筋骨序贯推拿治疗膝骨关节炎的临床疗效,从局部检测胫骨软骨下骨骨密度（bone mineral density,BMD）,同时三种代表性的血清标记物血清骨钙素（bone glaprotein,BGP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（tartra-resistant acid phospha-tase,TRACP）、血清Ⅰ型前胶原氨基末端肽（typeⅠprocollagen N-terminal peptide,P1NP）两方面检测治疗前和治疗后6个月的变化,再结合肠道微生态情况探寻该手法的作用机理。方法:选取原发性膝骨关节炎患者60例,按照数字随机方法分组,分为筋骨序贯推拿治疗组30例与常规推拿手法对照组30例。观察两组治疗前、治疗后及6个月后的西安大略和麦克玛斯特大学骨关节炎指数量表（Western Ontario and Mc Master universities osteoarthritis index,WOMAC）和雷瑟曼膝关节评分（The Lysholm knee score,Lysholm）的变化,比较两组之间的差异;采用双能X线测量胫骨外侧感兴趣区,对比两组患者推拿治疗前胫骨软骨下骨骨密度及推拿治疗后6个月的BMD变化,比较两组之间的差异;采用酶联免疫吸附剂测定法（Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA）检测TRACP、P1NP、BGP在推拿治疗前及治疗后6个月变化,比较两组之间差异;采用16Sr RNA基因序列分析将两组患者治疗前及空白健康对照组粪便中肠道菌群测序,进行质量分析,对比样本组间差异;使用LEf Se分析,对群落关键物种进行筛选;将差异物种对比KEGG数据库分析进行差异性菌群功能预测。将筛选出的标志性差异菌灌入碘乙酸（monoiodoacetic acid,MIA）诱导模型小鼠胃中,并对治疗组小鼠行膝关节屈伸手法,处死后,观察膝关节骨切片和CT骨扫描结果。结果:（1）在两组推拿治疗结束后筋骨序贯推拿治疗组和常规推拿手法对照组的WOMAC评分均下降、Lysholm膝关节评分均上升,经统计学分析后呈现显著差异（P<0.05）,治疗后6个月随访时两组WOMAC指数升高,但仍然低于治疗前;Lysholm膝关节评分均有降低。（2）两组患者在治疗前胫骨骨密度和治疗后6个月胫骨BMD进行比较,治疗组组内评分统计学差异明显（P<0.05）,对照组组内差异不明显。两组患者治疗前血清标记物和治疗后6个月血清标记物水平比较,治疗组BGP、P1NP均有升高,TRACP降低,组内评分差异明显（P<0.05）,对照组组内差异不明显。94个样本共得到2017个操作分类单元（Operational Taxonomic Unit,OTU）,其中KOA组分析得出1873个OTU,HC组分析得出1696个OTU,两组样本有1552种OTU重叠。两组粪便样本的肠道菌群组成都以厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门及变形菌门为主。在属水平,两组样本中排在前4位的菌类依次为大肠杆菌属、法氏菌属、拟杆菌属及普雷沃菌属。粪杆菌属、奇异菌、考拉杆菌等在KOA组明显富集;而巨单胞菌属、蓝菌门、普雷沃菌属在KOA组中显著降低。KOA组在代谢等相关通路的基因显著降低,统计学差异明显（P<0.05）,其中涵盖糖代谢、脂代谢、氨基酸代谢、能量代谢、生物降解和代谢为主。（3）用粪杆菌属灌胃的MIA诱导KOA小鼠,两组在治疗前后CT显示骨骼变化不明显,HE染色观察小鼠的胫骨也没有明显的结构变化。结论:（1）筋骨序贯推拿和常规推拿手法治疗膝骨关节炎,都有较好的疗效。但在降低患者WOMAC功能和Lysholm膝关节功能评分方面,筋骨序贯推拿优于常规推按;治疗组在延缓KOA退变导致的疼痛和障碍上效果较好,提示筋骨序贯推拿有一定的远期疗效。（2）筋骨序贯推拿可增加KOA患者软骨下骨骨密度,常规推拿组不显著。治疗组可一定程度上改善KOA患者血清中骨质代谢情况,提示有增加骨形成抑制骨吸收的作用。膝骨关节炎患者肠道菌群在丰度方面,与正常人之间无差别,但菌群群落构成差别较大;本研究发现KOA组肠道菌群与健康组有明显差异,主要是粪杆菌属、考拉杆菌、奇异菌在KOA组明显富集。而蓝菌门、巨单胞菌属、普雷沃菌属在KOA组中显著降低。粪杆菌属、考拉杆菌及巨单胞菌属可作为区分膝骨关节炎患者和健康人群的菌群生物标记物。膝骨关节炎患者体内肠道菌可能通过代谢途径影响膝骨关节炎的发生和进展。（3）模拟该手法的屈伸手法在MIA小鼠模型上的效用不明显。