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背景以树突细胞(Dendritic cells,DCs)为基础的免疫治疗在延长白血病患者治疗后的无瘤生存期及清除微小残留病灶,预防复发中发挥重要作用,其基本原理是利用DC强大的抗原递呈能力及激活初始T细胞的特性,在体外扩增产生DC后,负载白血病抗原使之成熟,然后回输患者体内,迁移到T细胞聚集的淋巴器官,激活自身的初始T细胞,产生特异性的抗白血病免疫反应,杀伤白血病细胞。而白血病患者自身的DC功能存在明显的缺陷,如DC表面的MHC分子及共刺激分子表达不足;白血病细胞分泌的大量抑制因子导致了DC的发育及成熟障碍;未成熟DC会异常募集抑制性T细胞等,这些都可以造成DC无法有效激活T细胞产生特异的抗白血病反应,因此如何提高患者的DC功能成为国内外关注的重点。至于DC细胞的来源,除了传统的骨髓及外周血外,部分学者根据白血病细胞和DC具有共同起源的特点尝试将白血病细胞直接诱导分化为DC并取得了一定进展。白血病来源的DC不仅具有了抗原递呈细胞的特性,同时携带有白血病抗原,已成为免疫治疗的一个重要研究方向;但是目前传统的诱导分化体系如细胞因子(Cytokines,CK)组合和钙离子载体(Calcium ionophore,CI)等还不能将所有亚型的白血病细胞诱导为DC,并且现有体系诱导DC的过程中,仍然存在周期较长,产量偏低,成熟度不高,易产生免疫耐受等问题,这些都制约着白血病来源DC向临床应用的发展,因此进一步探索更加成熟的诱导体系成为目前研究白血病来源DC的重点,而体系组合的选择成为突破的难点。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone deacetylase inhibitors,HDACi)是一类在转录水平调控基因表达的化合物,它可以通过抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,阻断细胞周期等发挥抗肿瘤作用。而目前的研究同样证实HDAC的异常募集是白血病细胞分化成熟障碍的一个关键机制。根据上述理论和实验结果,我们推测HDACi除了能够在抑制白血病细胞的增殖中发挥重要作用外,也应该可以作为一种新型的诱导分化药物,在诱导白血病细胞向DC分化方面发挥重要作用。目的本实验在以上研究背景的基础上,以HDACi代表药物丙戊酸钠(VPA)与传统诱导分化剂的组合为切入点,重点观察VPA联合细胞因子及A23187的组合方案诱导白血病细胞向DC分化的能力,拟建立一个更成熟的诱导分化体系,为白血病来源DC的体外扩增提供一种新选择。方法将VPA、CK组合(GM-CSF和IL-4)和A23187作用于白血病细胞(K562细胞和THP-1细胞),诱导其向DC分化,其中以CK组合及A23187作为阳性对照组,取VPA及其与CK和A23187联合作为实验组,同时设阴性对照组;单独CK组合组诱导10天,结束前2天加TNF-α刺激成熟,其它各组诱导4天,隔天半量换液,并补充药物至初始浓度;诱导过程中在倒置显微镜观察细胞形态改变,诱导结束后用流式细胞术检测细胞表面DC标记(CD1a、CD83、HLA-DR、CD86、CD80)的改变,RT-PCR检测各标志RNA水平的改变,混合淋巴细胞反应检测其刺激淋巴细胞增殖的能力能力;测定结果用(x|—)±s表示,均数比较采用t检验,组间比较用单因素方差分析,以P<0.05为有统计学差异。结果VPA单独作用于K562细胞时,倒置显微镜下未见典型树突样形态;流式细胞术检测细胞表面标记发现细胞表面的DC标记(CD1a、CD83、HLA-DR、CD86)与阴性对照组相比有明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),但表达水平偏低;同时检测其刺激淋巴细胞增殖的能力未见明显增强;而THP-1细胞在VPA作用下,细胞形态和表面DC标记与阴性对照组相比均没有明显变化;VPA与CK及A23187联合作用时,K562细胞形态仍未见明显改变;但两种细胞表面的DC标记较单独应用时均有明显升高,部分标志的差异具有明显统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测显示趋化因子CCR7的表达也明显升高;其刺激淋巴细胞增殖的能力也有显著加强;并且VPA联合CK诱导4天的效果明显优于CK单独作用10天的效果。结论VPA自身不具有诱导白血病细胞向DC分化的能力,但可以与CK及A23187产生明显的协同作用,提高CK及A23187诱导白血病细胞向DC分化的能力,并且能明显缩短CK的诱导周期,提高白血病来源DC的纯度、成熟度及刺激淋巴细胞增殖的能力,因此这种组合方案是一种更有效的诱导白血病细胞向DC分化的方法,可以为白血病来源DC的体外扩增提供一种更佳的选择。