Enterococcus faecalis磷酸甘油氧化酶基本性质的研究

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核糖体小亚基RNA(16S rRNA)基因为所有的细菌共有,且其与细菌整个基因组的变化相比,具有高度的保守性。因此用16S rDNA保守区引物进行PCR扩增,可快速检测细菌。本文用16S rDNA的PCR方法并结合其它形态学方法,对筛选出的产磷酸甘油氧化酶(GPO,EC 1.1.3.21)细菌进行了鉴定,确定为Enterococcus faecalis(粪肠球菌)。通过发酵罐扩大培养,经离心收集菌体,超声波破碎,40%~80%硫酸铵沉淀法或双水相萃取,继而采用Q-Sepharose FF、Phenyl-Sepharose CL-4B、Chelating Sepharose FF和Sephacryl S-200HR层析纯化,纯化的GPO在还原、非还原SDS-PAGE中显示单一条蛋白着色带,对应的表观分子质量为67.6 kDa,用HPLC测得其表观分子质量为121 kDa,综合分析推测该酶由2个分子质量相同的亚基以非共价键聚合组成。GPO的最适反应温度为35℃,最适pH为8.0。在最适条件下以磷酸甘油二钠为底物时的米氏常数为3.22×10-2mol/L。Hg2+、Ag2+和SDS对酶活性有较大抑制作用,EDTA、Fe2+和Triton X-100有部分激活作用。还对GP0的污染酶作了一定的研究。
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