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中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)是一种小分子分泌型糖蛋白,同时也是一种理想的急性肾损伤标志物。通常情况下,NGAL在肾上皮细胞中表达水平较低,当肾脏受损时,尿液和血液中NGAL水平在2 h内迅速升高,且升高水平与受损的严重程度和持续时间呈正相关。因此NGAL的临床检测数据对于术后急性肾损伤的早期监测和预后具有重要价值。实验室的质量控制是临床实验室获得可靠检测结果的重要环节,质控品则是保证质控工作的重要物质基础,同时在企业的试剂研发环节,也需要质控品对试剂进行性能评价,因此研发出高稳定性的NGAL质控品对于临床检测和试剂生产具有重要意义。本研究主要是利用基因工程技术构建重组表达载体pCold-NGAL,并在大肠杆菌中诱导表达,通过镍柱亲和层析,获得具有生物活性的NGAL蛋白;随后经过筛选NGAL冻干保护剂,制备稳定性较好的NGAL冻干质控品。通过基因工程法合成人源NGAL成熟肽段(GIn20-Gly197)的cDNA序列,连入克隆载体pUC57得到克隆质粒pUC57-NGAL;双酶切pUC57-NGAL和pColdⅠ,得到NGAL和pColdⅠ的DNA片段,通过连接反应构建原核表达载体pCold-NGAL;对重组质粒进行酶切和测序验证,结果表明重组表达载体pCold-NGAL构建成功。将重组质粒pCold-NGAL转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约为25KDa的重组NGAL蛋白,且该蛋白为可溶性表达。对蛋白诱导表达条件进行优化,包括温度、时间和IPTG浓度,结果显示优化后可溶性蛋白表达量占菌体总蛋白含量33.2%;镍柱对重组蛋白进行亲和层析,经SDS-PAGE检测,结果表明纯化后重组NGAL蛋白纯度约为97%,紫外检测浓度为1.1 mg/m L,试剂检测得到活性收率为47.2%。以低值NGAL质控品(重组蛋白NGAL浓度为157.1 ng/mL)25℃复溶稳定性结果为依据筛选NGAL冻干保护剂,制备冻干稀释液。稀释重组蛋白NGAL为低、中、高三水平,浓度分别为157.1 ng/m L,550 ng/m L,1571.4 ng/mL。冻干三水平NGAL质控品,NGAL试剂检测评价其批内精密度、稳定性,并采用第三方平台检测比较结果的差异性。结果显示:三水平冻干质控品4℃、25℃复溶稳定期限均是7天;37℃、50℃、4℃恒温保存稳定期限分别是14天、7天、至少4个月;冻干质控品活性靶值范围内,-20℃可反复冻融3次;各条件稳定性满足生产要求。第三方试剂检测结果显示,自制NGAL冻干质控品在不同检测平台不能通用,精密度(CV)检测结果也存在较大差异,其中质控品在雅培平台检测的精密度显示均低于5%。本研究实现了重组NGAL蛋白的原核可溶性表达,得到具有生物活性的高纯度重组蛋白;并且制备出了稳定性良好的质控品,为NGAL冻干性质研究和质控品的市场化应用奠定了基础。