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目的类风湿关节炎(RA)是一种以多关节滑膜炎和血管翳形成为主要病理特征的炎性自身免疫病,其发病机制尚未完全明确。研究发现血清淀粉样蛋白A(SAA)作为一种急性时相反应蛋白参与了 RA的发病机制。本研究通过构建体外血管形成三维模型试图从细胞和分子水平探究SAA介导的p38MAPK信号途径在RA血管形成机制中的作用;并进一步从临床角度分析RA患者血清SAA浓度与疾病活动度指标DAS28、ESR和CRP的相关性以及SAA与RA自身抗体的关联性。本研究旨在为研究SAA在RA发病机制中的作用,并为寻找RA诊断与治疗的靶点奠定实验基础。方法1.采用western blot方法分析SAA刺激下的p38MAPK信号途径在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的激活和表达。2.MTT实验、细胞迁移实验和体外血管形成三维模型分别分析p38MAPK在SAA诱导的HUVECs增殖、迁移和血管形成中的作用。3.酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测RA、系统性红斑狼疮(SLE)、其他自身免疫病、骨关节炎(OA)及健康对照(HC)人群血清SAA的浓度;并检测RA和OA患者滑液SAA的浓度。4.免疫组织化学技术检测RA和OA患者滑膜SAA的表达。5.评估RA患者血清中SAA的浓度与疾病活动度DAS28、ESR和CRP的相关性,并进一步用ELISA方法检测了 RF-IgA,RF-IgG,anti-CCP阳性和阴性的RA病人血清中SAA的水平。结果1.SAA刺激内皮细胞后,p38MAPK信号通路被激活并发生磷酸化,phosph-p38MAPK表达量增加。2.在加入p38MAPK信号蛋白抑制剂后,内皮细胞的生长受到了明显抑制,且具有浓度依赖性;SAA可显著诱导内皮细胞发生迁移及血管形成,在加入p38MAPK信号通路抑制剂后,SAA诱导的内皮细胞的迁移及血管形成效应被阻断。3.RA 血清中 SAA 含量[(6.15±3.27)mg/l]显著高于 SLE 组[(2.54±0.31)mg/1],OA 组[(1.42±0.97)mg/1],其他自身免疫病组[(1.55±0.98)mg/1]和健康对照组[(1.45±0.72)mg/1],(P<0.05)。RA 滑液中 SAA 含量[(7.63±3.39)mg/1]显著高于 OA 组[(1.54±0.4mg/l)],(P<0.001)。4.病理学结果显示SAA主要表达于RA患者滑膜的血管内皮细胞、巨噬细胞、成纤维细胞及血管周围。SAA仅少量表达于OA患者的滑膜衬里层、成纤维样细胞及血管周围。病理学结果提示,SAA在RA滑膜组织中高表达,与OA相比,SAA表达的量和位置均有显著差异。5.RA患者血清中SAA的浓度与DAS28、ESR和CRP均呈正相关(R2=0.6147,P<0.001;R2=0.4422,P<0.001;R2=0.3919,P<0.001)。RF-IgA 阳性的 RA 患者血清SAA的浓度[(6.53±3.33)mg/l]高于阴性的患者[(5.41±3.00)mg/l],但差异无统计学意义(P=0.127)。同样,RF-IgG阳性的RA患者血清SAA的浓度[(6.50±3.17)mg/1]高于阴性患者[(5.29±3.37)mg/1],差异也无统计学意义(P=0.116)。Anti-CCP抗体阳性的患者血清SAA的浓度[(6.88±3.36)mg/1]显著高于阴性的患者[(4.20±2.02)mg/l],(P<0.001),但是 anti-CCP 与DAS28 无相关性(R2=0.0154,P=0.250)。结论1.SAA在体外激活了人脐静脉内皮细胞中的p38MAPK信号通路;p38MAPK抑制剂阻断了 SAA诱导的内皮细胞的增殖、迁移及血管形成,提示p38MAPK信号蛋白很可能直接参与了 RA血管翳的形成,在RA患者骨与软骨破坏中发挥作用。2.与其他自身免疫病及健康对照组相比,RA患者血清中SAA的含量显著增高;病理学结果显示,SAA在RA滑膜组织高表达,与OA组相比,SAA表达的量和位置均有明显差异。提示SAA可能参与了 RA的炎症反应。3.RA患者血清SAA浓度与RA的疾病活动度评分DAS28显著相关,提示SAA可能成为评估RA疾病活动度的新的血清学指标。